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标题:[已解决]HPLC做梯度条件不满足,取其一个梯度坐等度洗脱可不可以?

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swordxhy[使用道具]
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HPLC做梯度条件不满足,取其一个梯度坐等度洗脱可不可以?


    各位老师好,我们单位的EISD-HPLC只有一个输液泵(岛津LC-10AD),没有办法满足梯度洗脱的条件。我发现资料上我要测的人参皂苷大约在20分钟出峰,而资料上梯度洗脱的时间却有55分钟之久,我能不能取20分钟时所在梯度的流动相比例做等度洗脱呢?
                 
以下是资料上的梯度条件:
时间     乙腈(%)      水(%)        流速(ml/min)
0-23      20            80                     1
23-45     20            
80                     1
45-47     47            53                     1
47-55    100            0                      1

     另外,岛津LC-10AD泵的压力单位是psi吗?
   新手上路,求各位老师多关照啊!

[ 本帖最后由 swordxhy 于 2011-3-21 12:56 编辑 ]
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  • miracle   2011-3-19 14:54  可用分  +2   鼓励新手发起话题交流!欢迎常来! ...
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hplcangel[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 swordxhy 于 2011-3-19 11:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

    各位老师好,我们单位的EISD-HPLC只有一个输液泵(岛津LC-10AD),没有办法满足梯度洗脱的条件。我发现资料上我要测的人参皂苷大约在20分钟出峰,而资料上梯度洗脱的时间却有55分钟之久,我能不能取20分钟时所在梯度的流动 ...

谁不想时间短一点啊,人家走55分钟肯定是有原因的啦,后面肯定还有东西没出来,而且梯度还要再平衡回到初始比例呀。你不能用那个比例走等度的。如果要走的话,你等出峰以后,停下来,换上有机相把没冲出来的东西再快速冲出来,再换回你的流动相平衡,平衡好进下一针。
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unknow[使用道具]
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回复 #1 swordxhy 的帖子

选20min对应的溶剂比例肯定能把目标物冲出来,但分离效果要差,而且,如果有极性更小的物质还可能会55min也冲不出来。

压力单位是可以通过面板更改的。
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应该可以,我们做的其它东西药典上是梯度洗脱我们也是岛津单向泵的,可以尝试等度洗脱,但估计出峰时间和峰形有可能变化,可以摸索下流动相各比例
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用等度的话你能保证所有峰的分离度吗,还是人参皂苷后面出的峰能洗脱出来吗?
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swordxhy[使用道具]
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回复 #5 hplcangel 的帖子

我走等度可以走50分钟左右,这样后面东西应该可以出来了吧?
后来我查资料这样做是有点不太合适,那我的流动相乙腈与水的比例定多少为好呢?
以下是资料上的梯度条件:
时间     乙腈(%)      水(%)        流速(ml/min)
0-23                 20                        80                                 1
23-45              20                         80                                 1
45-47              47                         53                                1
47-55            100                         0                                  1
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swordxhy[使用道具]
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回复 #2 unknow 的帖子

岛津LC-10AD上怎么调压力单位啊?我发现那几个键不能调啊!
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swordxhy[使用道具]
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回复 #3 心情se567 的帖子

后来想想我那样做不太合适,我的流动相比例应该从什么比例开始试好呢?50%左右还是20%左右还是其他什么的?
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如果是单一的一个人身皂苷是可以的,我们也用岛津等度洗脱过。
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QUOTE:
原帖由 swordxhy 于 2011-3-21 12:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我走等度可以走50分钟左右,这样后面东西应该可以出来了吧?
后来我查资料这样做是有点不太合适,那我的流动相乙腈与水的比例定多少为好呢?
以下是资料上的梯度条件:
时间     乙腈(%)      水(%)        流速(ml/min)
0-23       ...



QUOTE:
原帖由 swordxhy 于 2011-3-21 12:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
后来想想我那样做不太合适,我的流动相比例应该从什么比例开始试好呢?50%左右还是20%左右还是其他什么的?

先试试40%乙腈,看看情况再调比例

压力单位应该不可以调吧,系统工作站自带的
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