【求助】双荧光素酶报告基因求助

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】双荧光素酶报告基因求助

13 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】双荧光素酶报告基因求助

daod[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态离线

发表于 2015-3-17 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近在做细胞转染实验做双荧光素酶报告基因，实验结果与预测结果相差很大，数据结果比阴性对照还低，阳性对照和阴性对照都正常不可能是转染的问题，难道是预测结果不准确？还请各位大侠不吝赐教，先谢谢大家了！

wood533[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态离线

发表于 2015-3-17 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

问题描述的再具体一点吧，比如
1. 你在什么细胞里测试的，转染的是293T细胞，还是其他什么细胞
2. 你做哪个方面的双荧光素酶报告，做启动子？还是做wnt等
3. 你这个实验是关于激活抑或抑制方面的吗？

daod[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态离线

发表于 2015-3-17 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 wood533 于 2015-3-17 16:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

问题描述的再具体一点吧，比如
1. 你在什么细胞里测试的，转染的是293T细胞，还是其他什么细胞
2. 你做哪个方面的双荧光素酶报告，做启动子？还是做wnt等
3. 你这个实验是关于激活抑或抑制方面的吗？ ...

1.我做的是一个关于皮肤毛色的基因，转染的细胞有两种：人皮肤黑素瘤细胞（A375）和293T，转染效率已经用绿色荧光蛋白和阳性对照做过了，转染效率还可以。
2做双荧光是为了检测启动子的活性区域。启动子活性区域是师姐预测的，不知道是激活还是抑制作用，但是就算是抑制也不至于比阴性对照还低吧？
还请指教，谢谢了！

wood533[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态离线

发表于 2015-3-17 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 daod 于 2015-3-17 16:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1.我做的是一个关于皮肤毛色的基因，转染的细胞有两种：人皮肤黑素瘤细胞（A375）和293T，转染效率已经用绿色荧光蛋白和阳性对照做过了，转染效率还可以。
2做双荧光是为了检测启动子的活性区域。启动子活性区域是师姐预测的，不 ...

你启动子克隆了多长？你能否保证你现克隆到的启动子就一定有活性。你说比阴性对照还低，低多少？

daod[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态离线

发表于 2015-3-17 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 wood533 于 2015-3-17 16:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你启动子克隆了多长？你能否保证你现克隆到的启动子就一定有活性。你说比阴性对照还低，低多少？

克隆片段2500多，启动子活性区域是师姐预测的，我现在也在怀疑是不是预测错了。结果比阴性对照稍低一点，相差不是很大。

wood533[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态离线

发表于 2015-3-17 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 daod 于 2015-3-17 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

克隆片段2500多，启动子活性区域是师姐预测的，我现在也在怀疑是不是预测错了。结果比阴性对照稍低一点，相差不是很大。

相差不大，没有统计学意义，就不能说比阴性还低，也有可能是根本你的启动子就没有活性造成的，有阳性对照么？

daod[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态离线

发表于 2015-3-17 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 wood533 于 2015-3-17 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相差不大，没有统计学意义，就不能说比阴性还低，也有可能是根本你的启动子就没有活性造成的，有阳性对照么？

有阳性对照，很高！阳性对照的比值能达到100左右。

wood533[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态离线

发表于 2015-3-17 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 daod 于 2015-3-17 16:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有阳性对照，很高！阳性对照的比值能达到100左右。

那很有可能就是你的目标启动子的问题了，因为你克隆的启动子有没有活性，你也不知道

jude[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 72164
精华 1
积分 599
帖子 754
信誉分 102
可用分 4721
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-5
状态离线

发表于 2015-3-17 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大