液质联用

为以前一直用单四极杆定量，现在要用串联质谱，虽然也查了一些文献，可有有几点非常糊涂，请指教。

（1）串联质谱定量时，用MRM，以其第一级的母离子定量呢，还是以后面产生的碎片峰定量，还是碎片只是定性验证一下看看？
（2）分析步骤是不是：1全扫描；2选择母离子产生碎片峰
在全扫描时其他的碰撞气不启动，直接得到单级的信号？

串联质谱定量时，是以后面产生的碎片峰（子离子）定量。但是这一子离子是由母离子在碰撞室产生的特征性碎片，所以用MRM定量灵敏度会比用SIM定量好很多。

建立方法的步骤是：用一定溶度的标准品溶液（1-10 ug/mL）Tune化合物的一级质谱条件，找到母离子的最佳质谱条件，然后对母离子进行打碎，优化碰撞能量，得到其特征性的子离子。最后利用该质谱条件和该母离子→子离子对进行定量。

Good luck!

还有一个问题想请教：你说的子离子定量，我的内标是D代物，打碎后，其特征离子与被测物相同，不会有影响吗？

还有我若想用更多的碎片验证该化合物，为此灵敏度就要下降，还是不会下降很多.？

你既然用D代物作内标，最好选择一个子离子也和待测物子离子分子量不一样的做定量，否则可能有干扰，因为两者在色谱上一般不分离，而质谱检测器可能会有记忆效应，建议换个结构类似物当内标，或者找一下分子量不同的子离子。

至于你想用更多的碎片验证该化合物，灵敏度肯定要下降。建议定性和定量的实验分开做。

谢谢！可是文献上报道都是用的D代内标，而且这两主要碎片峰都一样。你说的接近的两峰质核比一样，若没完全分开，我知道在单四极杆中定量是不可能的。若是在三级四极杆质谱中，会不会有点不同? 若还是影响，主要是在线性还是什么别的方面?
还有这个问题一般公司的软件设置，会不会有所处理呢，象DECONVERLUTION啥的?

没错，一般文献报道都使用D代内标，但他们选择的子离子一般不一样。

就你的情况而言，如果化合物和D代内标的子离子也一样，分析两个的检测会互相干扰，比如你只加化合物而不加氘代内标时，氘代内标也出峰，反之亦有可能，建议你先试试，如果没有这种影响，就最好不过啦！

如有问题，想从软件上入手建议改改扫描时间间隔。

我已经试过只加内标和只加化合物的情况，似二者没有干扰，很幸运！

现在在做灵敏度时又碰到点问题。

我原来扫描时间是0.4，改为0.3后峰形更难看了，更趴了！这二级质谱在这方面改变会改善一些吗？一般设为啥值呢？扫描间隔多少为最佳？

还有一个TUNE的问题，做之前最好是用该化合物TUNE一下是吧。我看别的公司是用一个三通接上LC、MS、和DIFUSSION PUMP。这个是切换阀进一次样TUNE一下还是怎么回事？不明白啊，不知道VARIANS的仪器哪个咋操作。

还有因为我是先用的仪器上现成的MRM方法，想改一下，先全扫描后选择碎片扫，和先母离子扫后碎片离子全扫。结果楞是不出峰了，不知道是啥原因啊。

另外说一下VARIANSLC-MS-MS，说明书很不详细和清楚，没有象其他公司专门的TUNE界面，改变参数时可很清楚显示离子流的变化，雾化气和干燥气气流压力无法手调。也许是我还不熟的原因，但是觉的不是很好用。

你一下子又提了很多问题，呵呵！

1）既然化合物和D代内标没有互相干扰，那你很幸运，就用D代内标好了。

2）扫描时间一般设置是0.2s，这和你化合的峰宽有关，一般一个色谱峰需要保证有至少13个数据采集点。

3）关于Tune一般有两种做法：

做法一：用一个三通接上LC、MS、和syringe pump，LC设置相应流速（实际上样品的流速及有机相比例，一般用50％有机相，0.2mL/min (ESI)，0.8mL/min (APCI）)，syringe pump 注射化合物溶液，一般1-10ug/mL,5-10uL/min，优化各个参数。一般采用该方法。

做法二：切换阀进一次样TUNE一下（flow injection)，等你经验丰富了，建议你用该方法，优点：因采用较低浓度样品，基线较低。

4、看了你的描述，我还是不太清楚。作MRM只要你选对母离子和子离子，给予最佳打碎能量，应该没什么问题。

Varian的仪器没用过，他们没有安装培训吗？
建议打电话给他们。

谢谢！太感谢了！

我是想说MRM出峰还可，换了FULL SCAN--SIR就不出峰了，不知哪出毛病了，我只是改了扫描范围呀，还要变别的吗？

还有用的是别人设好的方法：定量离子一个，定性离子两个，我把定性离子删除后，做定量离子扫描，咦，不出啥峰了？怪，难道除了这个还要改别的吗？

还有TUNE，这VARIANS没有单独的TUNE界面，我找不到它的手动TUNE。AUTOTUNE可用吗？可是这可是和CALIBRATION一起操作，这会影响别的吗？

作MRM和FULL SCAN是不一样的，有些参数会改变，否则灵敏度会差异很大。

还有，你原来的定量有没有作出来，如果定量作出来了，把定性离子删除后，做定量离子扫描不出峰，应该是仪器有问题，否则方法是不一定能移植的。而且质谱需要经常去TUNE吗？质谱的部分作一类化合物是参数差不多的，作多个化合物本来就是要有取舍的，质量数不偏的话，就不用CALIBRATION，老兄，质谱乱搞会乱套哦！