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标题:[未解决]用LC-MS做组织分布时原型药响应越来越高？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 20  
dingdang[使用道具]
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发表于 2007-8-22 00:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用LC-MS做组织分布时原型药响应越来越高？

做一个大鼠组织分布预试验，用LC-MS检测，同一样品隔一定时间（2小时或1晚上）再测时，含量越来越高达到第一次测定的2倍左右，内标响应无很大变化。

1）样品最后一步是用甲醇溶解，原型药在甲醇中是很稳定的。
2）做样前同一样品连续进样几次其响应是比较稳定的。
3）该方法做血药时是很稳定的。

请大家帮我分析一下原因？多谢多谢！
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发表于 2007-8-22 00:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同一样品隔一定时间（2小时或1晚上）再测。

该样品是重新提取，还是提取后进样？

如果是提取后进样，可能原因是：溶剂挥发或代谢物在复溶溶剂中分解成目标化合物。
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发表于 2007-8-22 00:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有可能是目标化合物转化。
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dingdang[使用道具]
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发表于 2007-8-22 00:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼上俩位的指点！

是处理之后的同一份样品，放置一段时间再测，目标化合物的浓度越来越高。原来浓度很低的组织，放置后再测，其峰面积明显增大。

1）溶剂挥发的可能性较小。因为进样瓶放2个小时，没有那么多溶剂挥发。
2）如果是目标化合物和其他代谢物发生了转化，这种情况如何确证？原型药是一个皂苷，在样品处理时如何控制转化？

恳请大家提点建议，多谢了！
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dingdang[使用道具]
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发表于 2007-8-22 00:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
想到以下两点，不知是否合理?

1）样品处理后，代谢物容易转化成原形药吗？这是一个皂苷，文献报道它的代谢产物主要是掉糖的，脱甲基的，还有开环反应。
2）有没有可能是原形药与某种结合型存在一个动态平衡，放置后结合型的不断释放出游离型的？如果是这种情况该怎么处理?
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发表于 2007-8-22 00:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般药物在体内的二相反应是生成葡萄糖醛酸或硫酸酯轭合物，固可以用相应的酶水解后检测，或者可以用酸水解检测，但这样可能要测苷元。你还可以查下相关文献。
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dingdang[使用道具]
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发表于 2007-8-22 00:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1）谢谢！该皂苷在体内主要是发生一相水解反应。苷元和原型药的活性是有差异的，所以组织分布还是计划测原型药。
2）新发现一个问题是，用已腈沉淀蛋白法处理组织样品后发现有离子抑制现象，进几针后响应明显降低。样品处理打算再加大乙腈用量或考察SPE。大家还有什么建议？

谢谢！
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发表于 2007-8-22 00:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
皂苷用乙酸乙酯做液液萃取应该还可以，你试过没？
固相萃取稳定性不是特别好，成本也较高。
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dingdang[使用道具]
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发表于 2007-8-22 00:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个皂苷连四个糖，极性较大。液液萃取我试过，乙酸乙酯基本提取不出，乙酸乙酯加入部分异丙醇还是不行。所以只好在沉淀蛋白或者是SPE上下功夫了。另外，不知道用强酸如高氯酸处理如何，进质谱有何影响？
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发表于 2007-8-22 00:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dingdang 于 2007-8-22 00:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这个皂苷连四个糖，极性较大。液液萃取我试过，乙酸乙酯基本提取不出，乙酸乙酯加入部分异丙醇还是不行。所以只好在沉淀蛋白或者是SPE上下功夫了。另外，不知道用强酸如高氯酸处理如何，进质谱有何影响？ ...

如用高氯酸沉淀蛋白，处理后最好还要中和一下，此外它对质谱估计有很强的抑制作用，所以建议不要去试了！你还是先试试SPE吧！
不行的话，个人建议还是作水解检测苷元，很多文献多这么做！
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