PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】 PCR出现很多杂带 咋办？

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标题:【求助】 PCR出现很多杂带 咋办？

xingyi08[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 PCR出现很多杂带 咋办？

我的目的条带是1230bp，用的2000marker，体系20ul，pcr结果出现很多杂带,怎么回事？望高手指点一二！！
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

降低引物的量，提高退火温度
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提高退火温度 使用高保真的酶
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 cj_mondy 于 2015-4-2 17:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
提高退火温度 使用高保真的酶

提高退火温度之后就P不出来了！什么带都没有。试过54-62度。我的Tm值是67。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道你的最终目的是干什么，其实只要P出你要的目的条带，割胶回收即可，如果觉得产量太少可以拿产物再P一次。
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bring[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
来个梯度试试
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物是不是不够特异？比对一下基因组，看看是不是还有其他序列是一样的
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S6044[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

8楼正解，这个步骤不用太纠结。
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newway[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
梯度PCR摸索最佳条件，消除不了杂带就可以考虑换引物
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veiwu[使用道具]
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发表于 2015-4-2 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要是只要产物的话，切胶就可以了。
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