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标题:【求助】电泳中的弱带

缘yuan[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】电泳中的弱带

请问，为什么pcr产物电泳时有些泳道会有些很弱的条带。应该不是P的很弱，因为重复两次，第二次时那些在第一次较弱的带就没有了，我怀疑是上样时阳性带的样品漂入了周围的泳道造成的。不知道大家有何见教，谢谢！附见中亮带周围的弱带就是我所说的。


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zhezhe[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

弱带应该是没有P出来吧，具体原因不太清楚，学习。。。
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ending[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

设的有阴性对照吗？看看阴性对照情况，可能是P的弱了，也可能是污染
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我有时候也有这种情况，阴性对照中是没有的，感觉是没有P出来，这种条带不可信
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wood533[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为这些弱带是PCR污染所致，当时我跑巢式PCR，这种现象也时有发生，建议设阳性对照、阴性对照及空白对照，重新跑PCR，如果有条件PCR相关试剂可以换一批试试。还有提个建议，跑电泳时最好加Mark。祝实验顺利！
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yizhi[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个会经常遇到，建议点样的时候要快，根据齿槽孔的大小不要点太多，鉴定的时候18孔的齿槽8微升作用足够了，另外p的时候最好设阴性对照
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这不是漂移,是PCR的问题你只需要亮的条带即可,这种情况很难找到真正原因
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能你的样品或者是试剂污染了
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milkdog[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用什么为模板，如果菌液浓度大的话会出现这个情况，没什么事的
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yes4[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最右边的那个就是阴性对照。又P了一次，问题就解决了。我的解释是因为这些DNA是从小鼠脚趾抽提的，取样的时候是用同一把剪刀，可能剪完阳性小鼠，又去剪的是阴性小鼠，会有少量串样，导致阴性样本中混有少量阳性DNA，PCR加模板时可能刚好把这些混入的少量阳性DNA吸取了，结果P出微弱条带。
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