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标题:【求助】细胞复苏后不贴壁了

鸽子不哭[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】细胞复苏后不贴壁了

新复苏的细胞，没有离心直接培养的，但是细胞不贴壁。
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鸽子不哭[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
取出的细胞是黄色的，以前去的其他批次的细胞是红色。这批是以前的师兄冻存的。
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kulee[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

复苏细胞状态不好跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多，即细胞越老，越禁不起低温的折腾。复苏后，细胞有个休眠期，大约7-14天不等。只要不死，你就慢慢养着。突破了某个时间点，你会发现细胞又神奇的康复了。但要等到细胞状态良好，传2代以上再做实验。尤其是流式、RNA干扰之类的。千万不能急，细胞状态不好就做的话，就等于在烧钱。
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发表于 2015-4-6 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我发现你们实验室很怪，先是用生化培养箱培养细胞，这又不除冻存液就直接培养，DMSO是有毒的，细胞肯定活不了。
你们实验室是不是刚组建。
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qhyu[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实不做额外要求的话，细胞复苏后都可以直接培养，待第二天贴壁后再换掉含有DMSO的培养基是完全可行的。
现在你的细胞不贴壁，你可以试一试先去掉DMSO。
你说细胞冻存液的颜色和以前不一样，那估计是培养基不一样，建议你用和配置冻存液的培养基复苏细胞。。。
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youyou99[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有可能是冻存的时候出现问题，DMSO等需要预先配置好，因为其溶解要放热
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这次我养的细胞贴壁也出现了问题，我怀疑是我用的冻存液是先配好备用的，请问冻存液只能即配即用吗？
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caihong[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
今天扔了两管复苏了三四天的细胞，老师说是已经死了。。。痛苦。。第三次复苏，加了血清，看明天情况咋样了。。。。或许要放多几天看看能不能长得好啦。。。
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qhyu[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的离心去了dmso，可是今天第二天也不贴壁啊，怎么回事呢？
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zzzz[使用道具]
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发表于 2015-4-6 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
复苏细胞状态不好跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多，即细胞越老，越禁不起低温的折腾。复 ...

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细胞在第几代冻存比较合适？如果细胞不贴壁是因为细胞在休眠状态，而不生长，需要时间复苏，那次期间需要换液吗？怎么换液才不会把悬浮的细胞换掉呢？
谢谢~!
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