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标题:【求助】冻存的细胞提RNA

嗅嗅[使用道具]
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发表于 2015-4-6 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】冻存的细胞提RNA

各位大大，本人前段时间-80 冻的细胞，现在想提RNA， 但-80拿出来后直接马上加Trizol 裂解不了啊，吹打近20min才稍微有溶解，就是一团。后面加异丙醇离心后也不见RNA沉淀，比较急啊，求大大们处理过类似的情况么？ 是否应该拿出冰箱后用小的研杵研磨散呢？  谢谢指教！
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JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-4-6 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

就漩涡振荡一下，浑浊就好。
提RNA其他细节操作也要注意。
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发表于 2015-4-6 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么不先经过复苏程序以后再提呢？
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发表于 2015-4-6 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
复苏后养一段时间！ 想提多少就提多少，多好啊！
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发表于 2015-4-6 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哈，肯定裂解不了，冻着呢，要等它完全溶解，再加TRIZOL
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发表于 2015-4-6 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们一般是加了TRIZOL再冻存
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嗅嗅[使用道具]
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发表于 2015-4-6 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么不先经过复苏程序以后再提呢？

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但我没用保护剂什么的，直接冻在超低温冰箱-80的，怎么弄呢
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zzzz[使用道具]
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发表于 2015-4-6 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
但我没用保护剂什么的，直接冻在超低温冰箱-80的，怎么弄呢

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我觉得如果你冻存的细胞比较多，可以尝试一下进行复苏，说不定可以。
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zzzz[使用道具]
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发表于 2015-4-6 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
但我没用保护剂什么的，直接冻在超低温冰箱-80的，怎么弄呢

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如果你直接提取，最终没有得到RNA可能有两个方面原因：一个是TRIZOL裂解的细胞量太少，还有大部分还冻着根本没有进入裂解液中；另外一个就是你裂解的过程中RNA有降解。关键就是你在用TRIzol解冻细胞的时间，这个过程不能太长而且必须保证TRIzol充分裂解细胞。研磨也是一种方法，不过凡是要接触样品的东西，都要经过DEPC处理，包括研钵和研杵。
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