药物分析

采用液相检测EDTA铁，保留时间不稳定，第一天6.6分，第二天10分，第三天3分，第四天10分

保留时间跟我玩起来捉迷藏有戏，请大家多多指教。以下是详细内容。

柱子 Agilent XDB C8

流动相：40%四丁基氢氧化铵溶液3.25ml加水130ml，再用8.8%甲酸溶液调PH至3.30，加甲醇125ml，再用水稀释至1000ml
，此时PH约为3.50

液相条件 波长254nm ，流速1.0ml/min进样量20  EDTA铁浓度0.1mg/ML


第一天：保留时间6.6 分，没在意

第二天：使用前一天流动相、柱子，保留时间跑到10分，以为是EDTA铁在新使用的柱子上有一定饱和时限，所以勉强解释了一下，希望以后会稳定。继续试验

第三天：新换流动相，柱子未换，保留时间跑到3分，以为甲醇加多了或者试剂的问题，狂配流动相，连续更换3次流动相，样品保留时间均在3分。
放弃，无语了。

第四天：死马当活马医，继续用前一天的柱子，流动相，前一天的样品，保留时间重新回到了10分。

以上样品在四天检测当中，峰形和峰面积没有明显变化。

分析以上：排除了流动相、样品、柱子、仪器的因素，实在找不出原因了。还怀疑是流动相的PH导致样品不稳定，后来查询了EDTA铁的PKA在pKPK1=0.0 (CO2H)
pK2=1.5 (CO2H)
pK3=2.00 (CO2H)
pK4=2.69 (CO2H)
pK5=6.13 (NH+)
pK6=10.37 (NH+)  来自维基百科

EDTA铁为二元酸  PKA为2.00 依据此 在PH3.5 是稳定的  

为什么呢？ 不过从目前来看，好像是流动相PH的原因啊

[ 本帖最后由 维拉2010 于 2011-4-29 10:19 编辑 ]

是不是柱子没有饱和好啊！

反相柱流动相中使用离子对试剂（四丁基氢氧化铵）要充分平衡，使其在固定相上充分饱和才可以，40%的四丁基氢氧化铵溶液至少要80ml以上，可以用0.1ml/min的流动相过夜，再测。

pH在样品的pKa±1内，保留时间变化最大。
调pH时注意温度对pH计及pH的影响，校准及测量温度控制在25±1内。
另外，注意柱温箱控温。

每次检测完毕后色谱柱充分清洗了吗，流动相的PH是否调节到位？

第一天：甲醇按照比例配制，合适。时间6min
第二天：原流动相中的甲醇过夜挥发，时间10min
第三天：重配流动相，配错了。
第四天：甲醇又挥发了，刚好10min。
换个人试试或者双人复核吧，看你就知道刚入行，道行太浅。

你这是应该是离子对试剂残留所致的

每次用完后，色谱柱要冲洗干净，小心填料变性

貌似没有提到柱温，你柱温控制了吗？
不清楚 该物质对温度的敏感性。
有些物质柱温变化，保留时间随之变化很明显

40%四丁基氢氧化铵是离子对试剂，需要平衡的时间较长，再者样品处理是否完全一致？是否一个用流动相，一个用水

柱温问影响这么大？