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标题:【求助】细胞传代

鲇鱼少爷[使用道具]
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【求助】细胞传代

这张图片是传代三次后的细胞,里面有好多黑点,谢谢解答···


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2015-4-7 11:01
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dog002[使用道具]
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我的也是好多~~~~黑点~~~~,求解释!
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鲇鱼少爷[使用道具]
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有的说是支原体污染,但是用了好多抗生素都不行,还是有···至于黑胶虫需要换血清我想换换先试试···
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zhy平平[使用道具]
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经常听人谈到碎片的问题,其实这个问题产生个人觉得有几个因素:
1、消化不当造成的(贴壁细胞)
2、细胞状态不好造成的(死亡细胞的碎片)
3、污染造成的。很多人怀疑支原体,如果细胞来源正规,现在都用一次性的器皿,支原体污染没有想像的那么严重。如果怀疑是支原体,有一个简单的方法判断一下,排除传代操作不当外,细胞传代几次以后,细胞生长缓慢,培养基一般不混浊变色。此外,本人还遇到过另外的污染情况也能造成碎片增多,开始时,碎片增多,培养基颜色变化不明显,继续培养,你会发现碎片急速增多,培养基变黄,混浊。

对于你的样品,个人有一下建议:
图片显示你的细胞要么时半贴壁的细胞,要么时悬浮细胞,请确保传代操作没有问题。(如果是半贴壁细胞,建议不要过渡,是否有其他机械损伤)
如果是半贴壁细胞,轻轻振荡培养皿,换液再培养;如果是悬浮细胞,离心换液培养。观察培养基是否变色混浊
有条件做一个支原体染色。对于黑胶虫,我印象是这个东西一直有争议的,正规培养基一般不大会出现这个东西的,实在不放心,你可以用血清做一个对比试验。
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bs4665[使用道具]
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培养时也见过,每次传代后1d均见到,师兄说是细胞碎片,反正到现在还没出现过污染。
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langlang[使用道具]
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我的是在细胞里面
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鲇鱼少爷[使用道具]
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谢谢你,支原体染色用什么试剂比较好啊!还有如何用血清做对比试,是两种不同的血清培养相同细胞吗?谢谢···
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wawa[使用道具]
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换高倍镜观察小黑点是不是会不停的无规律运动.如果是,可能和我遇见的情况一样.你用的什么公司的血清
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mickeylin[使用道具]
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我之前养的细胞在培养液中也出现小黑点,换用进口血清,传几代后状况好了很多。
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箭头儿[使用道具]
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这种情况经常见的,有以下集中判定方式,一、拿个细胞空瓶在显微镜下看一下,看看培养细胞的一面有没有黑点,如果有的话,是因为在瓶子的处理过程中,有些贴壁的破损细胞或蛋白没有洗掉,可以把每次用完瓶子用水泡上,泡酸时一定要培养细胞的一面完全接触酸液,不能有气泡。二、要是瓶子上没有,但是培养细胞后有了,有两种可能,一是细胞碎片,二可能是血清里面的物质。
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