小中大【求助】western 中，目的蛋白没有，但是Marker ...
我最近在做Western 实验，奇怪的是，目的蛋白没出来，Marker 和一些很大分子量的杂蛋白暴出来了，模糊一片，第二次是MARKER暴出来了，条带很清晰，但是目的条带没有出来，而且背景很干净，到底是什么原因啊？
1. 我把ECL 染液滴到二抗上，它会发光，而且有杂蛋白暴出来，说明染液和二抗也没问题吧？
2.我在转膜后，用立春红对NC膜进行了染色，条带很清晰，对转膜后的凝胶用考马斯亮蓝进行染色，条带很弱， 说明我的转膜是成功的。
3.我用1：1000的比例稀释一抗，在 4度下孵育过夜，第二天在孵育二抗，进行后续实验。
4.在滴上显色液后，MARKER 位置上会显示很亮的光，可其余地方没有，就让我很奇怪，为什么MARKER能出来呢？
自己初学，没什么经验，希望得到大家的指导，谢谢
