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标题:【求助】拉曼图里的荧光是真正的荧光特征峰吗？

uuooii[使用道具]
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发表于 2015-4-17 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】拉曼图里的荧光是真正的荧光特征峰吗？

我们这里有做生物样品的拉曼光谱的，在获得的图里面有很强的荧光，有的说，如果拉曼得不到就用其荧光谱。可我想问一下，在拉曼谱里面得到的荧光背景，是真正的荧光特征谱吗？这和荧光光谱仪里面的荧光图有什么区别？望高手不吝赐教啊！
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youyou99[使用道具]
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发表于 2015-4-17 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原则上说，拉曼谱中的荧光和荧光谱中的荧光是一样的，只要激发波长和功率密度相同。注意横坐标要从波数变换为纳米，即用10000000nm（1cm）除以波数就行了。但有一点要注意，不同波长的激发光照射样品，得到的拉曼相近，但荧光可以有很大不同，甚至相同波长不同功率激发，荧光谱都大不一样。

[ 本帖最后由 youyou99 于 2015-4-17 11:14 编辑 ]
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发表于 2015-4-17 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的样品在同一波长激发下，用拉曼测得的荧光光谱与激光共聚焦荧光显微镜得到的发射谱就完全不同，我还不知道原因。
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gmt[使用道具]
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发表于 2015-4-17 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Yes, the spectra will be different if you use fluoresence spectrometer. The excitation intensity can make difference as well. If you are dealing with bio sample, try to use NIR laser, which will minimize your fluorescence. If you can still see some peak with fluorescence background, there are modeling or mathematical methods you can try. There are publications in these topics.
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youyou99[使用道具]
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发表于 2015-4-17 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说得好。
我试过氧化物的荧光，有差别。
不过
“注意横坐标要从波数变换为纳米，即用10000000nm（1cm）除以波数就行了”
为什么是这样的呢？？？
我这里的数据处理是10000000除以激光波长。
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发表于 2015-4-17 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 youyou99 于 2015-4-17 11:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
原则上说，拉曼谱中的荧光和荧光谱中的荧光是一样的，只要激发波长和功率密度相同。注意横坐标要从波数变换为纳米，即用10000000nm（1cm）除以波数就行了。但有一点要注意，不同波长的激发光照射样品，得到的拉曼相近，但荧光可以有 ...

“注意横坐标要从波数变换为纳米，即用10000000nm（1cm）除以波数就行了”？
Raman测定的是散射光，得到的是Raman shift. Raman shift和绝对波长（荧光光谱）之间要一个转换的吧。
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发表于 2015-4-17 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
生物样品一般荧光峰比较宽，用荧光光测试之前一般先会做仪器本身曲线校正也就是仪器本身的响应曲线，这样测出的荧光峰才比较准，特别是对于宽峰更要做这个较准。
而Raman光谱一般采集的区域比较窄（指的是波长区域），一般在窄的波长范围变化不大，因此一般不考虑仪器本身响应曲线误差，但是Raman光谱来测宽荧光峰，影响就比较大。
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发表于 2015-4-17 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说得好。
除了波峰的横坐标位置不同，拉曼测得的荧光和荧光光谱所得的荧光在走势（形状）上差别大么，谁有二者的图谱上传一下就好了。
Raman测定的是散射光，得到的是Raman shift. Raman shift和绝对波长（荧光光谱）之间要一个转换的吧。
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发表于 2015-4-17 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
换算关系应该是:拉曼位移值=10000000除以激光波长-10000000除以散射波长。
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veiwu[使用道具]
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发表于 2015-4-17 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
从两种仪器的结构及荧光与拉曼产生的原理来说,两者有相似的地方,在这种情况与是不是用傅立叶拉曼,理论上来说荧光会减弱甚至消失的.
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