分析标准与方法

第一次做新药，是一个中药复方口服液，主要成分中含有氢溴酸东蒗菪碱，质量标准制定如下：
5.1.1色谱条件
色谱柱：Promosil C18（250×4.6mm，5µm，博纳艾杰尔公司）；流动相：0．07mol/L磷酸钠溶液 (用磷酸调 pH值至6.0，含0.0175mol/L十二烷基硫酸钠)-乙腈 (2：1)；流速：0.8ml/min；检测波长：216nm；柱温：25℃；进样量：10ul。理论塔板数按氢溴酸东莨菪碱峰计算应不低于10000。
5.1.2 供试品和对照品溶液的制备
5.1.2.1 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg，置10ml容量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含1.018mg的溶液（东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445）。
5.1.2.2 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml，置锥形瓶中，加入2mol/L盐酸溶液30ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，滤过，滤渣和滤器用2mol/L盐酸溶液分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收容剂至干，残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
5.1.3 阴性对照品溶液的制备 按处方比例及工艺，制备缺洋金花的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含洋金花的阴性样品溶液。
5.1.4 测定方法
精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10u1，分别注入液相色谱仪(自动进样仪)，测定峰面积，以外标法计算含量。
5.1.5 系统适用性试验
分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性品溶液10ul注入高效液相色谱仪，阴性对照品在氢溴酸东莨菪碱峰位置处无吸收峰，即其它成分对测定无干扰，氢溴酸东莨菪碱峰与其它组分峰基线分离良好。
5.1.6 线性试验
     精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品10.16mg，置25ml量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置10ml量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，分别进样10ul，测得峰面积积分值。以对照品的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=1.3×107C-9243.77，相关系数r：=0.9997。表明进样量在0.2032～1.2192ug范围内呈良好线性关系。
5.1.7 稳定性试验
     精密量取供试品溶液5ml，按供试品（批号：2009010501）溶液制备方法制成供试品溶液，间隔一定时间(0，4，8，12，24，48h)重复进样，每次进样10ul，测得峰面积的RSD为1.78%，表明该溶液在48小时基本稳定。
5.1.8 精密度试验
     精密吸取上述对照品溶液10ul，重复进样6次，测定东莨菪碱的峰面积，结果 RSD%为0.58%(n=6)。表明本方法精密度良好。
5.1.9 重复性试验
     精密量取供试品溶液（批号：2009010501）5ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，分别测定东莨菪碱的含量，结果RSD为1.42%(n=6)。表明本方法有较好的重复性 。
5.1.10 加样回收率试验
5.1.10.1 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg，置100ml的容量瓶内，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，即得。
5.1.10.2 采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml/2ml/3ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定，结果平均回收率为106.7%，RSD为1.42%。
      回收率=（测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量）/加入东莨菪碱量

     因为是第一次作含量测定，有许多不明白之处，中药质量标制定准指导原则也说得不清不楚，许多都是按照自己理解摸索来的。
     [B]通过测定样品的平均含量为0.077mg/ml。线性试验是根据样品的平均含量，以样品的平均含量为中间值，制定的线性取样范围。[/B]
     根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则，按照80%，100%，120%的原则加入对照品，但是结果很不理想，加样回收率超过了200%，不知道是什么方面的原因，很着急，请大家帮忙分析一下，找出有错误的地方，我马上更改。

楼主，想问什么 用什么仪器测？问题重点也没标出来 难道是想让大家看这么大篇的文献吧？？

回收率大了这么多！计算没有问题吧，把你的结果的原始数据和计算过程写一下~

楼主，是不是计算的问题呢

加标200%？太高了吧？在试验过程中是不是污染了？

楼主做新药标准的，关注下。

楼主的加样回收率结果到底是什么，为什么前面有

“采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml/2ml/3ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定，结果平均回收率为106.7%，RSD为1.42%。”？

与后面“根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则，按照80%，100%，120%的原则加入对照品，但是结果很不理想，加样回收率超过了200%”矛盾呀！

看看你的计算是否有错误？加标后浓度体积变化！

不好意思 ，没有说明白 ，我用的是岛津的液相机子，用面积外标法计算，测定样品含量时的公式 为 ： 样品峰面积*10.18mg*98%/对照品峰面积*5ml*10倍*1.445
对照品峰面积为12404344.5，样品峰面积为6983970.5，6922532，6949904.5，6957659.5，
6965083.5

加样回收中对照品溶液2ml/2.5ml/3ml与80%，100%，120%表述的是一个意思，家养回收率计算公式为 ：杨品峰面积*7.8mg*样品稀释倍数*98%/对照品峰面积*样品取样量*100倍 *1.445

加样对照峰面积为1425672.938，对照品加入量为2.5ml时的峰面积为
3433927.75
3418554.25
3503073.25
3477568.5
3489245.25
3473198.5
另外，我如何确定对照品取样量，才能保证样品含量测定的准确度。

还是没看明白。不过我发现你的操作中存在一个问题：对照品峰面积为12404344.5，样品峰面积为6983970.5 差别有些大，对照品峰面积最好与样品峰面积差不多（个人认为要达到90%~110%），因为从你的描述来看，你用的是单点校正而不是标准曲线法，只有线性曲线过原点时对某个浓度的计算二者差别才不大。另外你如果加标回收，加标样测定出来的面积也要与对照面积大小相似，才能保证测定结果的准确，当然所有进样浓度都应该在确定的线性范围内。

再有你的200%具体计算过程贴出来，让大家看一看，我怀疑你的计算有误。