生物实验技术 » 讨论区 » 分析百问 » 请教关于双酶切位点相隔很近

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[未解决]请教关于双酶切位点相隔很近

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
kflsjjfdl[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 798
精华 21
积分 4494
帖子 1697
信誉分 177
可用分 5845
专家分 984
阅读权限 255
注册 2007-11-21
状态 离线
1

发表于 2008-12-15 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教关于双酶切位点相隔很近

刚刚入门连接时发现老是接不上去，才发现两个酶切位点太近，才6个bp。请教各位战友，两个酶可以共用一个buffer，如果分步切的话，可不可以第一个酶切后，灭活后直接加入第二个酶，而不用回收呢??拜托!!!!
顶部
maicaixiaogu[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6
UID 566
精华 9
积分 3784
帖子 1058
信誉分 141
可用分 3386
专家分 997
阅读权限 255
注册 2007-10-29
状态 离线
2

发表于 2008-12-16 22:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室有人做过 这样的实验

都切开了

不过如果是 两个酶切位点 共用几个碱基(能明白我的意思吗?)那就不行了

最好时一起切，方便

如果不好选择BUFFER，也可以分开切，但是我们实验室一般都回收，这样会损失一些，如果回收不当可能还要把末端损伤

祝好运!!!
顶部
amelican_beauty[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 800
精华 10
积分 3617
帖子 993
信誉分 150
可用分 3475
专家分 930
阅读权限 255
注册 2007-11-21
状态 离线
3

发表于 2008-12-17 23:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
gat/atc 是 EcoR V 的酶切位点呀

帮你查了下

BamH I 边上在有一个碱基的情况下 是可能切开 也不可能切开

EcoR V 在末端有一个碱基的情况下是 可以切开的

所以你看 你先切BamH I 末端还剩一个碱基

先切EcoR V 末端还剩三个

应该都可以的

你自己权衡吧

其实末端的碱基就是 起到一个“把”的作用，否则酶没有附着的地方，是没办法切的

个人意见仅供参考

再有设计引物时，一定要把这些问题都考虑进去

看起来设计引物简单，其实很多学问的

否则后面会带来麻烦
顶部