扫描电镜之家 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】DAPI染色不清晰如何解决

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 15  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】DAPI染色不清晰如何解决

wwwh[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 128411
精华 0
积分 3084
帖子 1727
信誉分 100
可用分 10252
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-11-1
状态 离线
1

发表于 2015-5-7 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】DAPI染色不清晰如何解决

我是96孔板贴壁细胞做的，吸尽培养基后加PBS洗3次，每次5分钟。
加-20℃无水乙醇后4℃放30min固定，PBS洗3次，每次5分钟。
加DAPI染液20μL，避光2min。
吸除染液，PBS洗3次，每次5分钟，荧光显微镜观察。
以上是我的实验步骤，我觉得拍出来的不够清晰，而且细胞周围看起来很糊，但不知道是什么原因，请各位老师，师兄师姐帮我分析下，谢谢你们。我试过加染液30μL、染色5min（染液是碧云天的，直接用），但拍出来的效果还没现在好。


查看积分策略说明
附件
2015-5-7 17:48
w134h3187851_1399858150_492.jpg (22.84 KB)
 
2015-5-7 17:48
w134h3187851_1399858152_679.jpg (19.37 KB)
 
顶部
xiaoxiaojinglin[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 131600
精华 0
积分 2351
帖子 1302
信誉分 100
可用分 7817
专家分 0
阅读权限 255
注册 2015-1-31
状态 离线
2

发表于 2015-5-7 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 添加 xiaoxiaojinglin 为MSN好友 通过MSN和 xiaoxiaojinglin 交谈

 小中大

【回复】

我觉得你的背景还是很蓝，dapi染完以后可以充分的洗，多洗几次，就会好很多:hand:
顶部
qinqinai[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 128422
精华 0
积分 3178
帖子 1855
信誉分 100
可用分 10762
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-11-1
状态 离线
3

发表于 2015-5-7 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

图像发虚，聚焦不好。调整一下显微镜。
顶部
女儿情[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 131730
精华 0
积分 1740
帖子 919
信誉分 100
可用分 5956
专家分 0
阅读权限 255
注册 2015-2-4
状态 离线
4

发表于 2015-5-7 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

染色没问题，照相聚焦不对
顶部
wawa11[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 131733
精华 1
积分 2168
帖子 1191
信誉分 102
可用分 7324
专家分 10
阅读权限 255
注册 2015-2-4
状态 离线
5

发表于 2015-5-7 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

确定是显微镜目镜和CCD采集不同步的问题
要在目镜下看清楚后再在屏幕上看着进行微调
清晰后再采集图片
可避免你照片发虚的问题
顶部
小妖精@[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 131728
精华 0
积分 1669
帖子 838
信誉分 100
可用分 5476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2015-2-4
状态 离线
6

发表于 2015-5-7 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我在视野里观察的时候，细胞本身就很模糊，拍照预览的时候是微调到最佳效果的。“目镜和CCD采集不同步”这个我不懂了，求教
顶部
wwwh[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 128411
精华 0
积分 3084
帖子 1727
信誉分 100
可用分 10252
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-11-1
状态 离线
7

发表于 2015-5-7 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

也说是聚焦不对，可我是调到最好状态时再拍的，还是模糊。
顶部
妮子@[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 128300
精华 0
积分 2457
帖子 1334
信誉分 100
可用分 8201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-10-29
状态 离线
8

发表于 2015-5-7 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

应该是焦距没调好。显微镜物镜40*倍及以上，镜头一般可微调，你试一试
顶部
大花猫bb[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 128333
精华 0
积分 2935
帖子 1649
信誉分 100
可用分 9653
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-10-30
状态 离线
9

发表于 2015-5-7 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

目镜10*，物镜40*拍的，我感觉我在用绳命在调焦距，眼睛都快残了。
顶部
wwwh[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 128411
精华 0
积分 3084
帖子 1727
信誉分 100
可用分 10252
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-11-1
状态 离线
10

发表于 2015-5-7 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我又用阴性细胞试了下，这次染完色后我用PBS洗了8次，结果还是模糊的。
顶部
 15  1/2 12››