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标题:【求助】PBS配制

宁小胡[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PBS配制


主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗，
0.05M储存液
Na2HPO4.12H2O－－66.15g
NaH2PO4.H2O－－6.66g
NaCl－－－－－100.00g
KCl－－－－－4.50g
加双蒸水至4500ml，用HCl或NaOH调PH到7.4即可。
使用时稀释5倍，即0.01M。
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ero11[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢,但是,Na2HPO4.12H2O要6615g!有没有弄错?
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ha111[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的实验室PBS的配制：(克/升)
NaCl:8.00g
KCl:0.20g
Na2HPO4.12H2O:3.12g
KH2PO4:0.20g
配制时可加入0.35gNaHCO3,用于调pH值。
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chengjie79[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主,免疫组化清洗用的 PBS好象常见浓度是0.01M,你用0.05M的浓度是不是高了一点?我配的pBS好象没有钾离子,对不对?(只有Na2HPO4.12H2O和NaH2PO4.2H2O及NaCl,双蒸水,我是用0.2MPB50ml+NaCl8.5~9g+双蒸水至1000ml配置,pH为7.25~7.35),免疫组化的PBS与分子生物实验的PBS相同吗?另外请教一下,我用于冰冻切片(我做的是关于胶原方面的抗体免疫组化,只能用冰冻切片)的一抗稀释液有的老师说不能用PBS稀释,必须用TBS代替,不知是啥原因?我用SP方法参照中山公司的说明说,与过氧化氢酶底物相配的溶液中不应含有叠氮钠,可是你的一抗稀释液中有叠氮钠,我该如何办?由于我的实验周期较长(半年以上),所以我的一抗(冻干粉剂)一直没有稀释,不知你有何建议?请问我的抗体用你所说的一抗稀释液稀释到1ml后分装成10管100ul的小包装后,如果我要用的化,比如它的最佳稀释度为1:100我进一步是用你所说的抗体稀释液稀释还是用0.01MPBS稀释?谢谢!
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宁小胡[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ero11 于 2015-5-11 17:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

多谢,但是,Na2HPO4.12H2O要6615g!有没有弄错?

sorry!
it's 66.15g
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宁小胡[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
免疫组化清洗用的 PBS好象常见浓度是0.01M,你用0.05M的浓度是不是高了一点?

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"使用时稀释5倍，即0.01M" 0.05M是储存液！
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宁小胡[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我配的pBS好象没有钾离子,对不对?

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严格的说我们这里的配方应该是KPBS，真正的PBS应该是您说的，不过它们在漂洗上的作用是基本相同的！
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宁小胡[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
免疫组化的PBS与分子生物实验的PBS相同吗?

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分子生物实验中好像TBS用的多一些。不过我们这里免疫组化与分子生物实验的PBS是相同的！
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宁小胡[使用道具]
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 小中大
一抗稀释液有的老师说不能用PBS稀释,必须用TBS代替,不知是啥原因?

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这个我也不太清楚，可能是您的抗体在tris.cl中更稳定吧？
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宁小胡[使用道具]
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发表于 2015-5-11 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一抗(冻干粉剂)一直没有稀释,不知你有何建议?

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1。我认为您应该先用PBS等缓冲液稀释一抗的粉剂，稀释到100ul分装成10个小包装（每个10ul就可以，当然也可以按照您自己的设想进行），－20或－70度保存。
2。使用时用抗体稀释液稀释到应用浓度。
3。您的实验周期较长，但是您可以把片子集中起来（不同实验组，不同时间等等）进行一次染色。这样就可以不用在抗体稀释液中加叠氮钠。叠氮钠其实就是在抗体稀释液较长时间保存时起防腐作用的，如果您在短期内使用则完全可以不加！
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