小中大 样品量少啊原来。那柱体积400?你是想装长柱子把这两个点分开吗?若是这样，我以前也遇到过类似的样品，当时想的也是把柱子装长一点期望分开，但效果不太理想，后来想柱子长了理论塔板数是多了，同时峰展宽现象也会严重。当然了，这也和样品的性质有关，这个就没准了!
如果你选定用硅胶柱分的话，建议硅胶选用H，摸一个保守的起始条件，等度洗脱。TLC点板跟踪，样品下来的时候那几个流分每瓶少接点(有人说甚至可以每瓶2-3毫升)。还有你样品量少，柱体积怎么大到400了，不可想象!!!
另外，可以试一下开放ODS，正相分不开的东西，没准反向分离效果很好的;或者你确定样品就两个点的话(样品相对来说干净)，可以直接上液相分啊!
或者你根据你这两个点在TLC板子上的情况，如254nm，365nm吸收情况，或者显色剂显色情况，如果两个点在板子上的情况不同，说明不是一类物质，可以考虑用凝胶分离。
我想到的就这些常用的经验吧。还有硅胶多少会死吸附样品的，而ODS和凝胶基本上是无损失的!看你要分离的样品到底有多少量。
还是个人意见，仅供参考!
