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标题:[未解决]液相色谱标准品与标准品的钠盐

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
090820040[使用道具]
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发表于 2011-5-20 14:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

液相色谱标准品与标准品的钠盐

请各位帮帮忙分析一下：

    我用反相C18柱分析NADH（还原型辅酶I），我现在买不到NADH的标准品，只能买到NADH-Na2（钠盐形式），我想问的是，它们对走色谱有没有影响，主要想对NADH定量。


     请大家帮我解答一下，非常感谢！
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  • miracle   2011-5-20 15:56  可用分  +2   鼓励新手发起话题交流！欢迎常来！ ...
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haohaorenjia[使用道具]
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发表于 2011-5-20 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个需要对你的流动相和目标物的化学结构进行分析：

结构式：


强碱中强酸盐，通常在溶液中以离子状态存在。

所以，只要流动相的pH在3以上，你的样品和标准品都是以相同的状态存在（离子），出峰时间是一样的。在计算的时候，记得把标准品的钠离子扣除就是了。
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猴子[使用道具]
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发表于 2011-5-20 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 090820040 的帖子

如果在柱上有保留并且保留时间一致，就说明实际的色谱过程是一致的，就能用。
另外，流动相中加入含钠离子的缓冲盐就可以避免或减小这种潜在的基体效应（这种效应可能会影响紫外吸收信号）。
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发表于 2011-5-20 18:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位的解惑

首先非常感谢你们的帮助！   
我采用的流动相是[乙腈-含有10mmol/L 四丁基溴化铵的200mmol/L的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液，pH 7.0]
因为我现在无法买到NADH（只能买到其钠盐），所以无法比较保留时间是否一致。此外，能简单解释一下基体效应么？

还有在计算的时候，怎样把标准品的钠离子扣除？

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发表于 2011-5-20 18:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 haohaorenjia 的帖子

谢谢各位的解惑
首先非常感谢你们的帮助！   
我采用的流动相是[乙腈-含有10mmol/L 四丁基溴化铵的200mmol/L的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液，pH 7.0]
因为我现在无法买到NADH（只能买到其钠盐），所以无法比较保留时间是否一致。此外，能简单解释一下基体效应么？

还有在计算的时候，怎样把标准品的钠离子扣除？

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发表于 2011-5-20 18:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #3 猴子 的帖子

谢谢各位的解惑
首先非常感谢你们的帮助！   
我采用的流动相是[乙腈-含有10mmol/L 四丁基溴化铵的200mmol/L的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液，pH 7.0]
因为我现在无法买到NADH（只能买到其钠盐），所以无法比较保留时间是否一致。此外，能简单解释一下基体效应么？

还有在计算的时候，怎样把标准品的钠离子扣除？

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发表于 2011-5-21 11:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大

回复 #1 090820040 的帖子

磷酸缓冲液的缓冲能力挺强的，所以你可以想一下不管是NADH还是NADH的二钠盐，在pH7的时候应该是同一种形式存在的，取决于NADH的pKa1和pKa2.根据你加季铵盐做离子配对试剂，我猜pH7的时候是离子太吧，不然就没必要加了。。

所以可以比较保留时间，没有扣除钠离子的问题。。

你是指基质效应？不知道什么是基体。。基质就是样品存在的环境，对样品的分离和离子化都有影响。。。
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haohaorenjia[使用道具]
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发表于 2011-5-21 11:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #4 090820040 的帖子

没有问题，你的方法是离子对色谱法，四丁基溴化铵和目标物的磷酸基部分形成中性的离子对，所以，无论是钠盐还是NADH，在流动相里都会形成相同的物质，所以，在该流动相条件下出峰时间是一致的。
计算时要扣除钠离子，最简单的办法是直接用摩尔浓度计算含量，这样，钠就没有影响了。

要注意的是这个流动相条件比较“伤柱子”，所以，色谱柱寿命要比常规的方法的寿命要短……
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发表于 2011-5-21 12:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #8 haohaorenjia 的帖子

感谢你的解答。你说这个流动相比较伤柱子，那有什么方法可以降低对色谱柱的损伤？
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发表于 2011-5-21 12:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #7 ttkl533 的帖子

谢谢解答！我用的乙腈和缓冲液的比例是5:95，但样品中的目标峰和其他杂质峰还是分得不很开，再降低乙腈的比例可能不太好吧？试过降低流速，但效果不好，流动相的ph也没什么问题，请问有什么办法？  另外乙腈浓度达到10%时，标准品的峰形很难看，有2个分不开的峰。
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