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标题:[未解决]能不能用Laemmli SDS上样缓冲液直接裂解酵母细胞

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
maomi520[使用道具]
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发表于 2009-1-19 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能不能用Laemmli SDS上样缓冲液直接裂解酵母细胞

请教个酵母蛋白制备的问题：

能不能用Laemmli SDS上样缓冲液直接裂解酵母细胞，然后取上清直接上样，这样可以吗，那么样品和缓冲液的体积比怎么控制
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uytdo[使用道具]
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发表于 2009-1-20 23:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们做酵母是先沉淀酵母，然后悬在一定体积的水里，尽量少吧，取决于细胞浓度。然后加等体积的2x上样缓冲液，煮沸5分钟，离心，上清去电泳。效果不错。
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huihuidetian112[使用道具]
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发表于 2009-1-21 23:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
需要先裂解，再98℃煮5min钟，这样就可以了。我建议你直接电泳。
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NVIDIA[使用道具]
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发表于 2009-1-22 22:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PIERCE有专门的裂解液，不过如果不是太在意的话

直接加电泳的loading buffer入细胞(可以离心收集细胞)，然后沸水浴5min

buffer当然是宁多勿少了，当然一般加个近百ul都肯定足量的

如果细胞碎片太多，离心后取上清电泳，细胞少就不会出这个问题
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iTIANMING[使用道具]
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发表于 2009-1-23 21:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的E.COLI的全细胞电泳 可以用sample buffer来裂解，上样比是一比一
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