适用于液质药动分析的样品制备
样品一般在血浆或血清中。离心去除血液里的血细胞获得血浆。血液凝固后去除固体得到血清样品。凝固血液清除血液细胞和凝血因子。血清比血浆易于处理,因为凝血因子已经被去除。当使用储存的血浆时,常会发现蓬蓬的凝块物,使样品很难进入吸液管pipette。不管是血清还是血浆,在进入反相柱分析前都要作进一步的处理。下面会讨论几种的方法用以制备可以用作液质药动分析的血浆和血清样品。
血浆破碎(crash)(有时称蛋白沉降)
血浆破碎/蛋白沉降是最常用的方法,因为它一般不要求特殊的仪器。用乙睛或甲醇沉淀去除丰度的白蛋白。
一个典型的方法描述如下:
血浆破碎(crash)/蛋白沉降方法:
1)放50µl血浆或血清在0.5毫升管中
2)加10µl内标
3)添加140µl冷(冻)的有机溶剂(乙睛或甲醇)然后涡旋
4)冷冻样品2小时
5)稍稍离心样品,分离出沉淀的蛋白
6)取150µl上清液至一干净管,加150µl液相的A相(水相).
在这时,样品里含的有机相大概为38%。如果你的化合物要求更低的有机相,来保留在色谱柱上,应增加第6)步添加的水相的量。
7)把6)项的样品,进行HPLC进样做液质联用的药动分析。
固相萃取:
许多人首选固相萃取法SPE。在SPE中,血浆或血清被直接加入一个疏水的固相中,一般是C18小柱。加入后,用有机相淋洗小柱,则感兴趣的小分子会被洗脱下来。SPE可以是手动的,也可以是小批量的。手动的SPE制备方法限制了样品的通量。可以用96孔板做自动化。一些人认为96孔板非常贵,一个96孔板大约为100美元,但是痕量成本时应该考虑易用性和最终产品的贡献。一些人发现:用于液质联用药动分析的最终洗提液(eluant)质量更好,反相柱的附着物和质谱信号的滚动(roll-off)发生在较低的速率。
液液萃取:
必须承认我们在这方面没有很多经验。这里是我所知道的。液液萃取只工作在那些可以分隔进入有机相的化合物。它可能是一种样品净化的有效方法。然后,这种技术很难自动化。