色谱爱好者之家

我现在做阿奇霉素粉针的色谱试验,参考文献资料0.607mM磷酸二氢钠:乙腈(20:80),波长210nm,流速1ml/min,柱温30oC,枸椽酸二氢钠阿奇霉素粉针用水溶解进样,2分钟左右就出峰.这是一个重叠峰,峰形很差,右边是个倒峰,可能是和溶剂峰重叠一起.我参考了好多文献资料,降低乙腈比例,提高流动相 pH值,甚至达到10,降低柱温到20oC,降低流速至0.5ml/min等,甚至把枸椽酸二氢钠阿奇霉素针换作希舒美,阿奇霉素出峰都很早,3min不到,都是一个重叠峰.用法用尽,效果均不好,

请教各位老师,为什么我做的和文献报道的相差那么大,还有其他什么办法可以将阿奇霉素的保留时间延长呢?我的色谱柱是venusil XBP-C18柱(4.6*200mm,5um),谢谢!

保留时间短的原因有很多，我也是初步帮你分析一下。

1、你使用的柱子是不是使用很久了，键合的固定相已经流失很多，因此造成阿奇霉素在柱子上没有保留。根据你调整乙腈的比例没有效果来看，柱子问题的可能性较大，最好换根柱子试试。

2、从阿奇霉素的结构式来看，其水溶液的碱性较强，根据初始流动相ph呈弱酸性，可能保留效果不好，但你乙腈提高了ph，仍不能保留，因此判断还是柱子问题。此外你将ph调到10.是不是导致了固定相水解，破坏了柱子。

3、对于碱性物质要想在酸性条件下进行实验，建议在流动相中添加一点庚烷磺酸钠离子对试剂，用离子对色谱来做。

采用210 nm检测时，枸椽酸会出峰，如tclls坛友所说，2min左右出的峰很可能是枸椽酸峰;建议分别对枸椽酸和阿奇霉素对照品进行对比分析，分别确定其是否出峰及其保留时间。

阿奇霉素未出峰，有两种可能：1.洗脱强度太大：导致枸椽酸峰和阿奇霉素峰重叠，可考考降低洗脱强度试试，或走一个缓慢的线性梯度，本人用液相做过有机酸的分析，枸椽酸(好象就是柠檬酸吧)只需很小的洗脱强度(1%或2%)数分钟即可洗脱，可待枸椽酸出峰后再提高洗脱强度; 2. 洗脱强度不够：为了排除此原因，可增加洗脱强度试试，前面设线性梯度时将洗脱终浓度点设置高一点即可。

再查查文献，看一看柱子和流动相是不是合适，其中流动相的pH有时对被分析物的色谱行为有非常大的影响，注意选择一种pH值合适的流动相;此外，一般的C18柱不耐受pH高达10流动相，如果需要使用高pH值流动相，应选择一根合适的柱子(不知venusil XBP-C18柱能否耐受)。

柱长对保留时间有一些影响，但并不显著。