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标题:流式细胞术工作原理
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流式细胞术工作原理

流式细胞术(flow cytom etry)也称荧光激活细胞分类术,是上个世纪70年代初发展起来的一项高新技术,80年代初研制出了稳定性能良好的流式细胞仪,开始应用到临床医学研究及疾病的诊断和监测,目前流式细胞仪已广泛应用于生物学、免疫学、遗传学、药理学、肿瘤学、血液学、病理学.

工作原理

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成。目前临床中运用流式细胞仪进行外周血白细胞、骨髓细胞以及肿瘤细胞等的检测是临床检测的重要组成部分。

基本结构

流式细胞仪由三部分构成 1.液流系统,包括流动室和液流驱动系统;2.光学系统,包括激发光源和光束收集系统;3.电子系统,包括光电转换器和数据处理系统。流式细胞仪的工作原理是使悬浮在液体中分散的经荧光标记的细胞或微粒逐个通过样品池,同时由荧光探测器捕获荧光信号并转换成分别代表前向散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号,经计算机处理形成相应的点图,直方图和加三维结构图像进行分析。用于FCM的样本是单细胞悬液,可以是血液、悬浮细胞培养液、各种体液、新鲜实体瘤的单细胞悬液以及石蜡包埋组织的单细胞悬液等。

液体中可溶性成分的流式细胞分析

从传统意义上讲,流式细胞技术只能分析细胞及其成分,液体中的可溶性成分则不能进行分析。然而,如果将液体中的可溶性成分结合在一种类似于细胞大小的颗粒(如乳胶颗粒)上,流式细胞仪便可以对其进行分析,这就是近年来发展起来的流式微球分析(Cytometric Bead Assay,CBA)技术。CBA的原理是将包被某种抗原或抗体不同大小的微球与待测液体中的相应成分反应形成抗原与抗体的复合物,再加入荧光素标记的第二抗体,微球上结合的待测抗原或抗体分子数量与其荧光强度呈线性关系,由此可对待测液体中与微球上包被抗原或抗体分子相对应的成分进行定性或定量分析,例如同时测定血清或细胞培养液中的多种细胞因子,同时测定血清中多种自身抗体。CBA发展的时间虽很短,目前所能检测的项目还不多,但其发展潜力不容忽视。已知检测细胞因子的方法有多种,包括靶细胞功能分析法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶免疫分析(Elispots)等,但CBA与之相比,其灵敏度极高、可达2pg/ml,而且能同时测定单个标本中的多种细胞因子。





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