液相色谱

小弟做的实验主要是测酶活和抑制剂对酶的抑制效果，流动相：0.8%乙腈，20mM三乙胺，用醋酸调PH到6.0，波长259nm。
第一天测的样品很正常，几个峰都能分开，产物出峰时间在6.3min左右。

但是第二天，在酶反应体系中加入了极少量的DMSO后，就在3.3min左右出现了一个非常大的峰，很怪异！我测过，DMSO在259nm波长处基本上是无吸收的，我重复了很多次，这个峰一直都出现。

这个突然出现的大峰是溶剂峰吗，为什么会这么的大，这个峰的出现导致我的检测的结果很不准确，产物出的峰都成山丘一样凸起来的了，根本就不是尖的，大伙帮我看看是怎么回事吧。

绝对不是溶剂峰，溶剂峰有一个特点，峰顶像“扫把"一样一样不规则！按照你的描述，结合图，我来解释你的反应的现象。图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，经过一天之后，底物越来越少，都转化为图一中的峰3，峰3在反应体系中，又不断转化为图峰2的峰1产物（产物的量不断增多）。从你以上图片可以分析得到，反应体系中各个产物的母核结构变化不大（尤其图一的峰3和图二的峰1之间），只不过图二的峰1产物的极性变大了！恭喜lZ，你这个发现可能就是一篇很好的paper。一个新的实验发现！当然不排除你实验设计有不合理的地方，比如反应体系不稳定，导致反应持续进行，希望LZ好好研究！

怎么没人来啊，出现个高手吧～嘿嘿

先这个峰肯定不是溶剂峰,估计是以前残留的杂质没冲洗干净,建议多冲洗点时间,然后再进样

单独进稀释后的DMSO出峰吗？

位置是否和第二张图的大峰一致？

“在酶反应体系中加入了极少量的DMSO后”，可能发生其他反应生成其他副产物了！

这个实验师兄以前做过了的，DMSO加入后不会出现那个奇怪的峰，而且DMSO也不会参与这个反应啊，我是重复师兄以前做过的实验，流动相和体系都是按照师兄的来的，我在想这个会不会因为我的流动相里面的有机相含量太低，水分含量太高，结果把柱子里面的填料给冲出来了啊？
C18的柱子流动相里面的水的含量最低能是多少啊？

系统提前一定要平衡好
会不会是DMSO和样品反应了之后产生的杂质？！
样品是不是新配的？有没有发现你第一张那几个峰在第二张图上都变小了！！
别加DMSO第二天，再进一下酶反应体系，看看有没有那个峰。

液相条件呢？
DMSO有时候基线不太好，但不会出现这样的溶剂峰。俺270nm液相DMSO无问题。

3.3min左右出现了一个非常大的峰

DMSO对保留时间有影响，3.3m可能为某主峰。。

你确定DMSO在259没有吸收，你可以进一针被稀释的DMSO，我以前用210nm时DMSO峰很大