液相色谱

我正在用高效液相做首乌藤中大黄素的含量的测定，条件是：流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(83：17);流速：1ml.min-1;检测波长：289nm;柱温：25℃，进样量：10ul。做的时候就发现一个问题，就是我的保留时间每进一针就会提前0.2S左右的样子。我觉得问题可能出在我的流动相上，磷酸溶液是缓冲溶液，时间长了电离的程度不同。但我不知道怎么去改进，还有，那些情况下，保留时间会发生改变，希望大家能讨论一下，谢谢!

你的这个流动相使用磷酸溶液作为水相的时候，如果没有充分混匀的话，一般很容易发生这种现象，微量的磷酸比例改变就会导致保留时间的巨大变化，这是这一类流动相（磷酸溶液- 甲醇）的通病，建议你使用全部混合均匀，使用等梯度洗脱，这样一般不会出现这样的问题的，如果还出现上述问题，一般来说可能时泵的问题了。