液相色谱

流动相0.1M柠檬酸，0.1M乙酸钠，100uM EDTA， 0.01%SOS (5%甲醇)
1.出峰时候还是随着时间往后移（例如第一针4分出峰，第二针4.5分出峰，第三针4.8分出峰）
2.峰有拖尾现象
3.有分裂峰（重新培养品，还是有分裂峰），检查了柱子，很干净

本人菜鸟不会再帖子中传图片，只能上传附件了，请各位大侠指点

图是相同样品同一浓度的两次图（图一没有加5%甲醇，图二加了5%甲醇）
（pump: waters 1525
   ECD: water 2465
   column: ODS）

1.出峰时候还是随着时间往后移（例如第一针4分出峰，第二针4.5分出峰，第三针4.8分出峰）
2.峰有拖尾现象
3.有分裂峰（重新培养品，还是有分裂峰），检查了柱子，很干净


1、
这种情况下，保留时间呈递增，有四原因。
a、柱温为控制。保留时间随环境变化而变化，高温，保留时间缩短，反之延长。
b、流动相组分变化，如蒸发，又如沉淀。蒸发使甲醇比例降低，流动相洗脱能力减弱，保留时间延长；蒸发沉淀等变化，使流动相pH发生改变，若样品酸性，pH降低，保留时间延长，若样品碱性，pH升高，保留时间延长。样品中性，pH几乎无影响。
c、色谱柱键合相流失。（检查柱效）
d、硅胶柱活性点变化。（加三乙胺或碱，钝化可避免）

2、
峰拖尾，这种情况下，原因可能为
a、柱超载。（降低进样量）
b、色谱柱硅羟基作用。（加三乙胺，屏蔽硅羟基活性）
c、柱坍塌。（检查柱效）

3、
原因：
1、进样体积过大。
2、进样量过载。
3、柱坍塌。
4、进样器损坏。（更换进样转子）


综上。。。不用俺总结了吧。。。。

峰分裂可能是样品浓度太大。
你做的流动相里有离子对试剂EDTA，柱子需要的平衡时间较长。柱没平衡，故出峰不正常。

多谢指点。
我们现在用的柱子是15厘米*4.6毫米的，柱体积应该是1.5毫升，我们进样20微升应该没有问题吧。（博士后之前让我进10微升，但是让指导我做实验的前辈给否了，但我进20微升）
另外，我们检查了柱子似乎没有坍塌。。。可不可能是因为长期用缓冲溶液柱子有无机盐沉积造成的（我们一直只用甲醇洗柱子），正确清洗一下柱子是不是有效，应该如何操作？
另外您说的：“硅胶柱活性点变化。（加三乙胺或碱，钝化可避免）”和“色谱柱硅羟基作用。（加三乙胺，屏蔽硅羟基活性）”，我没懂，是在流动相中家吗？三乙胺是碱性的吧，可是我们要用PH3.5的酸性缓冲液

样品浓度太大时什么意思？还是进样量太大了？浓度过大的话，不是应该出一道水平的线吗？
另外我查资料，工作电压400mV以上，EDTA会影响出峰，我们用的电压是800mV，会不会有影响

此外还有一些原因会导致上面的问题：
1.系统漏液；
2.尽量避免使用强溶剂溶解样品，会导致峰变形或分叉；
3.使用合适pH的溶剂，避免使样品在溶剂中既有离子态又有分子态，这样也会导致峰分叉或变形。

第一次分析这个样品吗？检查了柱子，很干净，是怎么检查的？

我的意思是：你的进样量太大，柱过载了。
相关液相的书籍以及有经验人士的总结，流动相里含EDTA的柱子需要很长时间来平衡

柱温稳定吗 溶剂密封情况