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标题:【讨论帖】种好你的96孔板

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【讨论帖】种好你的96孔板

做实验将近一年,从论坛上学到了很多东西,感谢很多战友给予的帮助,现将我在实验过程中的一点儿小小的经验拿出来和大家分享,希望对种96孔板子的战友有帮助。
刚开始用96孔板种细胞时细胞总是分布不均匀,第二天就会发现有些地方出现堆积性生长,而还有不少地方细胞则很稀疏,细胞密集的地方因细胞与细胞之间的接触抑制影响细胞的生长,这样就很难评价干预因素对细胞的作用,因此将96孔板种均匀也是进行后续实验的前提,现将我以前用的老办法和最后用的新方法比较一下,以让大家看看各自优缺。
1、老方法:这个是从论坛学的,就是种过板子后,用手将96孔板平拿起,左右晃动几下,然后再前后晃动几下,不过这种方法5个复孔中总有2-3个孔中细胞分布不均匀,多数情况下是孔的中间出现成堆分布,为此苦恼了一阵子。还又一次见一师姐将种好的板子放在摇床上摇了几分钟,结果更惨了,细胞全部跑到中间了。
2、新方法:这种方法简直是太好了,种的很均匀。先用抢将吹打均匀的细胞吸起来,让后将枪头紧贴着孔的一侧壁(注意枪头的尖不要接触孔底),然后将枪头中的细胞缓缓的打下去,种好之后千万不要摇晃板子,直接放到显微镜下看就可以了,此方法可以说是100%的有效吧。
希望对大家有帮助。
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purrr[使用道具]
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后来我也慢慢摸索了,用这种方法种的细胞很均匀
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JK.jon[使用道具]
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我有一个问题想请教LZ啊,你说的这种方法种96孔板很好的话,那24孔板和6孔板之类的大一些的呢?怎么样做才能做到较均一呢!这种方法适合吗?O(∩_∩)O谢谢
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@花开花落@[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 JK.jon 于 2015-6-9 17:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我有一个问题想请教LZ啊,你说的这种方法种96孔板很好的话,那24孔板和6孔板之类的大一些的呢?怎么样做才能做到较均一呢!这种方法适合吗?O(∩_∩)O谢谢 ...

新方法要不要再孔里先加些培养基?
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JK.jon[使用道具]
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还有一个问题就是LZ说的这种新方法用排枪做还行啊?还是需要一个一个孔的加啊!谢谢
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tudou85[使用道具]
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有个问题楼上也有人问了,这种方法培养基是怎么处理?先放还是最后放?加的时候又有什么要求吗?
多谢指点~
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remenb[使用道具]
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同学习,不知道对于种6孔板是否同样适用。找机会实验一下。
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queen[使用道具]
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楼主说得很好,我补充一点,从6孔板到96空板要细胞分散均匀,先用培养基把细胞稀释好,再把培养板放在适当的位置,加入细胞时和加入细胞后不移动培养板;如果空中有的地方没有培养基可吹打,但不要移动培养板,加入细胞后静置20-30分钟再移入培养箱。这样细胞一般都能长的很均匀。当然,前提是细胞消化的很好。
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purrr[使用道具]
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之前的经验是一定要先把需要的浓度调整好细胞,然后再种入板中。如果是96孔在中途要再次混匀,不然细胞又会沉淀一点的。至于楼主建议的沿一侧壁加还没有试过,过几天试试。
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mickeylin[使用道具]
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谢谢LZ的经验,我以前也是摇啊摇的,下次试试这个方法。
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