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标题:[已解决]梯度过柱洗脱,如果梯度变化过大会有什么影响?

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qianxiang23[使用道具]
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梯度过柱洗脱,如果梯度变化过大会有什么影响?

梯度过柱洗脱,如果梯度变化过大会有什么影响?是有气泡吗?谢谢大家了。
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kflsjjfdl[使用道具]
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2最佳答案
 
  换梯度时,要特意留一些上一梯度的溶剂在柱子上端。将下一个梯度的溶剂装在分液漏斗中(漏斗上端密闭,下端打开),放在柱子上面,这样柱子下端流出一滴,分液漏斗就会补充一滴,既可以控制柱子中溶剂的高度不变,从而使柱流速稳定;又可以使分液漏斗中流出的每一滴溶剂都被下面的溶剂稀释,从而完成两个梯度间的平稳过渡。

  我认为这样做有三个好处:

  1 省事。免得在旁边看着小心别让柱子流干。

  2 减少产生气泡的危险,特别是梯度比较大时,这招很管用。不过下个梯度要稍微多冲些时间才能平衡。有人说20%的浓度差是比较安全的。用此法,我曾经成功地将20%的甲醇-水溶液直接换到100%的甲醇,而柱子安然无恙。

  3 上个梯度溶剂被下个梯度溶剂慢慢稀释,使梯度的变化不致过于激烈,起到缓冲作用,效果有点像线性连续梯度,岂不是很好。
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naren4545[使用道具]
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不会有气泡,但是基线会很不平稳!
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猴子[使用道具]
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回复 #1 qianxiang23 的帖子

基线漂移严重些,色谱峰出的快些而已,不会有什么其他影响。
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zxlyid[使用道具]
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如果梯度变化过大,那么极性变化就很大,下一个极性的成分会分不开,一起下来。
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NVIDIA[使用道具]
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梯度过大会使后面的成分一起洗脱下来,一般极性溶剂的比例增加在5-10%,每次洗脱3-5个柱体积。
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yyid[使用道具]
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柱子跑得太有技术含量了
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luffygonww[使用道具]
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最好不要变化太大哦,可以慢慢改变梯度来洗脱嘛,而且变化大了,很有可能会产生气泡
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aasle[使用道具]
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9
 
一个梯度用多少洗脱剂,我从未算过,一般我一直洗到没有东西再换另一梯度,前一个洗脱剂当流到和柱高(我的是硅胶+样品+硅胶+棉花的高度)一致时,我直接加下一个梯度的洗脱剂,会不会有气泡,没考虑那么多,不过我的还好,除了开始洗脱时会有一点气泡,排除完后,换洗脱剂也没发现气泡,一直都很好,我的是干法装柱
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NVIDIA[使用道具]
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我前面说过了,可以按填料所占的柱子的体积算,如果粗分,想快一点,3个柱体积也行了,如果想分彻底一点,要5个柱体积,但分离好的前提是上样量不要超过2%,最好在1%
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