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标题:【求助】冻存液怎么配置？

windboy[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】冻存液怎么配置？


有些书上说，可以用50％的小牛血清（RPMI1640)＋DMSO，但问了其他一些同学，他们就直接用100％小牛血清＋DMSO， 我刚接触细胞培养，请问各位前辈，这个小牛血清浓度不同，有什么区别么？？
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dog002[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
冻存液首先关键在于冷冻保护剂，一般常用DMSO此类渗透性保护剂，一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份的DMSO混合而成，现配现用或配置后放入普通冰箱冰盒内冷冻保存，使用前于室温水浴融化。关键在于DMSO的终浓度为10％，对于普通细胞来说，小牛血清浓度似乎高点越好，但没有这个必要，用细胞培养液即可。
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fox_79[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们都是60%小牛血清+30%DMEM+10%DMSO,效果良好.
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xevin[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室一直是1分DMSO+9份培养液,效果一直不错,容易配置,操作简单
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dior[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
right. actually 5%-10% DMSO in FCS-containing medium is enough.
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windy+++[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那如果DMSO浓度稍微高了一点，大概13％，对细胞冻存有没有什么影响？？
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发表于 2015-6-10 09:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该没有影响，我曾经用过20％的DMSO，活化也没影响，不过后来一直用10％的
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S6044[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你们的小牛血清太浪费了，我们实验室都是30%小牛血清+60%DMEM+10%DMSO,从没出现问题.
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dior[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
20％小牛血清10％DMSO即可，注意冷却配好的冻存液。
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eor[使用道具]
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发表于 2015-6-10 09:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞冻存，复苏时提高存活率的关键是冻存时温度降低的速度，而不是冻存液。如果有程序降温仪的话，就只是用培养基加DMSO的冻存液，复苏时的存活率也在80％以上。
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