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标题:【求助】台盼蓝染色

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2015-6-10 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】台盼蓝染色

我购买台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒，由于我的细胞是悬浮细胞，而且量比较少，所以测量时，我取了100ul的细胞＋100ul的台盼蓝染色三分钟后，取10ul的细胞滴加到计数板上，在显微镜下观察发现，镜下呈现纤维状，丝丝缕缕连在一起，无法有效看清细胞，连续两天的情况都是如此，是染色的时间问题，还是其他，能指教。
急盼解答！
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fox_79[使用道具]
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发表于 2015-6-10 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
台盼蓝染色也要用试剂盒嘛？ 个人觉得有点多此一举，别在意哦。我觉得还是自己配的比较放心。台盼蓝染色(终浓度0.2%)母液与细胞悬液1：2或1：1.5体积左右混合，1分钟就可以看了。悬浮细胞用此法未发现问题。
如果细胞死后时间不久的话，边缘应当很清楚。整个细胞都是蓝色的，颜色较深，折光性下降。我觉得丝丝缕缕的连在一起，是不是你镜头脏了或者看到别的什么细胞了。
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发表于 2015-6-10 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们染色的时候台盼蓝也是自己配的。刚开始用双蒸水研磨配成4%的母液，用的时候再用PBS稀释１０倍，计数的时候，亮亮的就是活细胞，死细胞被染成蓝色。至于为什么丝丝缕缕的，我怀疑可能是台盼蓝时间太久了，或是析出了。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-6-10 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们用的台盼蓝是1%的，1：3的比例与细胞混合，一定要在三分钟内看细胞活力，不然细胞状态就不好了。
活的细胞是不着色的，面着色的细胞已死亡。
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发表于 2015-6-10 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室用的台盼蓝也是自己配制，浓度和以上几位学长差不多。只是染色时的比例要求不严。在计数板的细胞悬液上用最小号注射器滴一滴台盼蓝，加盖玻片使其混合。一分左右观察。镜下活细胞是透明的小珠状，死细胞被染成兰色。
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gogo[使用道具]
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发表于 2015-6-10 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们用的台盼蓝是0.4%的，1：9的比例与细胞混合，三分钟内用血球技术板计数。死细胞然成淡蓝色，活细胞拒染。
细胞丝丝缕缕连在一起可能是台盼蓝浓度太大，或者就是细胞的问题了。
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发表于 2015-6-10 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2015-6-10 15:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我们用的台盼蓝是0.4%的，1：9的比例与细胞混合，三分钟内用血球技术板计数。死细胞然成淡蓝色，活细胞拒染。
细胞丝丝缕缕连在一起可能是台盼蓝浓度太大，或者就是细胞的问题了。 ...

请说下您台酚蓝是如何染色的？您怎么配置的，我直接称量然后加入超纯水，配成浓度是0.4%的用时按1:9稀释，我染了几次都没发现死细胞被染色，还有我发现他们在配置时要研磨不知道为什么，我看我加入超纯水就溶解了。请指较
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gogo[使用道具]
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发表于 2015-6-10 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

台盼蓝很难溶解充分，4％的过滤起来也很慢，很难滤过。至于染色，浓度低一些可能也可以吧。请这方面有经验的多谈谈，谢谢。
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发表于 2015-6-10 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是用到双蒸水配成4%的台盼蓝母液，然后用PBS稀释10倍与细胞悬液1:1混合，可是做完片子以后显微镜下总是看不到细胞不知道为什么
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发表于 2015-6-10 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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先天性卵巢发育不全综合征
丝丝缕缕是析出，毫无疑问，你在显微镜下看下4%的母液就知道了，稀释到0.45%后，丝状物都消失了
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