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标题:【求助】如图，Marker使用的是DL2000的DNAmarke

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发表于 2015-6-16 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如图，Marker使用的是DL2000的DNAmarke

小弟最近再提一种蟹的RNA，如图，Marker使用的是DL2000的DNAmarker，在2000以一直会出现一条条带，第二条带仔细看的话会发现是两条。本来一直以为第一条是28s，后来发现所用trizol说明书上的28s大小都在2000以下（用的是同样的marker），DNase 处理之后第一条带就不见了。新鲜组织提出来的RNA也是这样。那这第一条带是不是DNA污染呢？第二条带是不是就是28S  18s没跑开合在一起了呢？求高手帮忙分析下
使用的是1%琼脂糖凝胶，150v  15min


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2015-6-16 16:17
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小妖精@[使用道具]
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发表于 2015-6-16 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

DNA污染会这么小吧，除非有特异的高拷贝质粒。你的RNA欲变性了吗？
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qinqinai[使用道具]
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发表于 2015-6-16 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

没有变性，提取出来测好浓度就电泳了
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今生如此[使用道具]
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发表于 2015-6-16 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

RNA的构象和DNA的是不一样的，跑出来和DNA Marker的大小有出入是很正常的，只要三条带比较完整就差不多的
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发表于 2015-6-16 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

换一下电泳缓冲液吧，不行重新配。
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发表于 2015-6-16 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

未完全变性的RNA跑胶可以看，但分子量估计不准确，而且最好用RNA marker。如果能用DNase除去的应该是DNA，但一般DNA不会那么小，还那么亮。
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yuanyuan[使用道具]
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发表于 2015-6-16 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我的经验是（针对植物的RNA）：
1、RNA中污染的DNA一般会在加样孔的最底端，不会分子量这么小。
2、RNA的电泳条带一般是28s、18s离得比较近，最下面是5s，有时跑变性胶是在18s下还会有两条带，应该是其他的组织中的RNA。
不知道动物组织中的RNA是否有所不同？
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发表于 2015-6-16 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

提取RNA是一个耗心的过程，要耐心。
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发表于 2015-6-16 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

生物方向整体好像都不咋样啊
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蓝色雨梦[使用道具]
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发表于 2015-6-16 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

“后来发现所用trizol说明书上的28s大小都在2000以下”，最近我提取的肌肉组织第一条带也是在2000以下，请教楼主，为什么之前别人提RNA28S都在4K左右，同样都是非变性1%琼脂糖电泳，也是DL2000~~
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