液相色谱

我的两种物质分离开要用到很极端的色谱条件，就是有机相甲醇只能加到3.5%左右，因为有机相的含量很低，所以出的峰很宽，目的峰要0.7MIN才能出完.

我现在用的流动相是20mM三乙胺，醋酸调PH到5.0，外加3.5%甲醇。
我的要检测的物质是UDP-氮乙酰葡萄糖胺，分子结构是，液相出峰图是，里面的第二个峰是我要的峰，就是8.7MIN左右出的峰。

我想问问大家，如果我想把峰型变好，峰宽变窄，几个物质完全分开的话，用怎么样的离子对试剂比较好一点。我看了下，我分离的物质是碱性的，如果用离子对试剂的话，怎么样的浓度比较合适呢？





[ 本帖最后由 a50044758 于 2011-8-11 23:49 编辑 ]

该物质为强碱弱酸盐，不适合用离子对色谱法，就该用离子抑制色谱法！
可以用三氟乙酸或甲酸把流动相的水相pH调成4，然后用50%的甲醇开始走个梯度，看有没有保留或能不能分得开，然后根据实际情况增加或减少甲醇的比例！

更换新型的色谱柱也是个不错的选择！

离子对试剂对色谱柱的损伤太大了！

那和我现在的方法的区别不大啊，我现在是用乙酸调PH，甲酸和乙酸调PH没什么区别吧，甲醇的含量是走梯度慢慢减下来的，最开始的甲醇含量是10%，为了分离开，我慢慢降到3.5%的。谢谢指教。

离子抑制色谱法 ：适用范围　
　　适用于3.0≤pKa≤7.0的弱酸及7.0≤pKa≤8.0的弱碱。对于pKa＜3.0的酸及pKa＞8.0的碱，应采用离子对色谱法或离子交换色谱法。
　　抑制剂通过向流动相中加入少量弱酸（常用醋酸）、弱碱（常用氨水）或缓冲盐（常用磷酸及醋酸盐）为抑制剂，调节pH值，抑制样品组分的解离，增加中性分子在流动相中存在的几率。
        既然物质是强碱弱酸盐，为什么要用 离子抑制色谱法呢？按照上面的说明来说，应该是选用离子对色谱法啊……

没有更好的柱子？试过碱性流动相吗？

试试这个，100mmol／L三乙基乙酸铵(TEAA，pH6.O)

可以使用亲水色谱柱和正相氨基柱试试。

大哥，你pH才调到5就已经有保留了，还用得着离子对吗？离子对是做强酸或碱的，不是做盐的，待测物呈碱性，但不是碱，是盐。

让你加甲酸或三氟乙酸是因为这些酸的酸性比醋酸强，可以有效促进待测样品水解为有机酸分子而抑制其盐电荷，这样就可以增加流动相甲醇的比例也能保证有保留，你不是说甲醇比例太少所以峰型太宽吗？用强一些的有机酸就可以增加甲醇的比例了！