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标题:【求助】荧光定量Ct值大于33就没有意义？

黄花菜[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】荧光定量Ct值大于33就没有意义？


据roche一位工程师说样品扩增Ct值超过33个cycle就没有意义（没有意义具体是什么概念也不明白）了，定量标准品最低浓度的也要Ct在33以上，请问大侠是否有道理？为什么？有公式可以推导么？好像很多临床样本定量结果Ct都在33以上。
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ha111[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是33吧？

是37吧？
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xuuuu[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

假如PCR的循环数是40个左右的话,CT值在33 (也就是10的三次方左右),这样低的拷贝数就很难确定是标本本身的CT或是由于污染引起的CT值(大家都知道PCR灵敏度很高,稍有点污染就扩增出来),为此,很多临床样本定量结果Ct都在33,即10的三次方,低于次则不报.
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是37以上。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般来讲，目前市面上的试剂盒都是以37为界，，对于可以定量的试剂盒来讲，如果试剂盒的灵敏度可以达到1个或10个，那么37以后为阴性，对于定性的试剂盒，由于样品的原因无法定量，所以以33为界，就是如maxlu 所说的，10的三次方,低于次医院的检测结果则不报.
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发表于 2015-7-1 22:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请教大家一个问题：我在跑pcr的时候同样的条件下跑不出来内参，只能跑出目的基因，请问 我是否可以分开设置延伸温度而用相同的循环数，这样是否就不怎么影响实验结果？谢谢各位了！！
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dotaaa[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

补充一下 我做的sybr green real time pcr，我目的基因引物Tm值分别为58.69和61.29，内参引物Tm值分别为62.04和62.41。我以前的pcr延伸条件是60度20秒。再次谢谢大家！
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黄花菜[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以将延伸温度改为61度1分钟试试。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用两步法，90度15秒，61度30秒，试一试吧！
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2015-7-1 22:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
天啊！老板要我做单个细胞的real-time PCR。也就是说起始模板只有两个拷贝的啊！可以做的出吗？
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