扫描电镜之家

关于扫描电镜参数高真空二次电子分辨率：≤3.0nm@30kv是什么意思？
还有高真空模式下优于6×10-4 PA???    高手快出现:tiger28:

应该是在30KV加速电压下分辨率小于等于3nm
第二个应该是说该设备可保持较高真空度吧

对于第二个参数，我认为应该是说，在高真空模式下，其观察室的真空度小于等于6×10-4 PA。像我们学校的那台场发射SEM，有常压模式，低真空模式和高真空模式，真空度依次降低…

30KV加速电压下分辨率小于等于3nm
10-4也不算高的真空。。。超高真空能10-8Pa呢

是弧菌的电镜实验，曾经做过一次，按照下面的步骤做的，但是效果不好，细菌拍下来不立体。

有一些不明白的地方是：酒精梯度干燥的时候，静置10分钟后，是不是需要离心，然后弃上清，再加下一个梯度的酒精干燥？这个地方一直想不通，如果不离心的话，酒精中的水分不是一直都无法散去吗？

按以下步骤制备扫描电镜样品： 2.5%戊二醛固定 4 h→磷酸缓冲液洗涤 3 次→乙醇梯度脱水（分别为 30%、50%、70%、85%、90%乙醇各 1 次，100%乙醇 2 次，15 min/次）→
乙酸异戊酯置换乙醇 2 次（20 min/次），每一步完成后经 8000 r/min 离心 5 min。将样品分别在 20℃、40℃和80℃冷冻 12 h，于冷冻干燥仪中干燥 12 h，备用。

我是这么做的。根据你的描述，有以下问题：①戊二醛固定时间不够；②洗涤液不能用水，必须用磷酸缓冲液PBS（1/15 mol/L，pH=7.2；配方：Na2HPO4*12H2O取23.876g+KH2PO4取9.078g，分别溶于1 L水中，然后将二者按照7:3的体积比混合（V:V），就可以了。）；③不知道你的戊二醛是怎么配的？戊二醛应该用以上的PBS来配置；④酒精梯度脱水，顾名思义就是要把水自由水除去，但是如果不按梯度，突然用100%来脱水是不行的，因为浓度太高，细胞形态就严重变形；按照我的这个梯度，我做出来非常漂亮；⑤ 在冷冻干燥前，必须把脱去自由水的样品按照从-20→-40→-80的梯度冷冻，目的把结合水固定住，梯度原理与④相同；⑥ 乙酸异戊酯的目的是置换掉乙醇，该药品神经毒，请在通风橱进行，不过只是有机物而已，偶尔接触没关系，不用怕。凡药品都有毒的。无法附图片，不然给你看看我拍的。希望对你有帮助。

“有一些不明白的地方是：酒精梯度干燥的时候，静置10分钟后，是不是需要离心，然后弃上清，再加下一个梯度的酒精干燥？这个地方一直想不通，如果不离心的话，酒精中的水分不是一直都无法散去吗？”这个肯定都要倒掉的啊？Ni都留着，然后继续加下一个？不要吓我。。。每一步，不仅仅是乙醇脱水这个，全都要弃上清啊。。我滴妈呀

前辈，我的细菌样品如果处理好，4天后才能拍电镜的照片，会不会影响结果？如果不影响，我是放在-80℃里保存4天呢，还是放在-20℃呢？谢谢啦