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标题:【讨论帖】关于国内狂犬疫苗生产和研发的现状和瓶颈

qqq111[使用道具]
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发表于 2015-7-8 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】关于国内狂犬疫苗生产和研发的现状和瓶颈


我们生产的是vero细胞培养的狂犬疫苗，最大的问题就是残余DNA的去除，想了很多办法均不理想，比方说离子交换层析啊，请各位老师指点迷经。再就是我们残余DNA检测方法已经比较成熟，标准梯度很好，有需要的老师可以交流一下。
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zbboom[使用道具]
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发表于 2015-7-8 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一种狂犬病疫苗去除残余DNA的方法
申请号/专利号： 200910067374
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及疫苗生产的提纯的方法　本发明解决了狂犬病疫苗以往在生产过程中单一采用柱层析方法ＤＮＡ去除难、蛋白容易聚合沉淀的问题。采用７５０ＫＤ中空纤维超滤柱或者３００ＫＤ超滤膜将病毒收获液进行浓缩和部分杂质的去除，再用非限制性核酸内切酶对ＤＮＡ进行降解，然后再通过超滤或者柱层析的方法将核酸酶去除。该方法具有容易放大、产品纯度高、ＤＮＡ去除效果显著、大大提高了疫苗的安全性。
申请日： 2009年08月05日
公开日： 2010年01月13日
授权公告日：
申请人/专利权人： 长春卫尔赛生物药业有限公司
申请人地址： 吉林省长春市双阳经济开发区永新路2号
发明设计人： 陈明;徐秀芝;刘华;张巍;张景芝;卢志平;杨文杰
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damingxia0904[使用道具]
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发表于 2015-7-8 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在狂犬的瓶颈主要还是残余DNA与HCP吧，以前把主要的精力放在了用什么方法去除收获液/浓缩液中的DNA，采用柱层析确实比较难以满足，有采用DNA酶处理的，现在应用的挺多的。在就是在整个的生产工艺进行控制，从细胞、毒种、培养工艺着手，尽可能的减少vero细胞DNA和HCP的释放！一起探讨啊！
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发表于 2015-7-8 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在国内一些大公司，如成大，长生，其vero细胞狂犬疫苗的指标已经符合标准了吧，其生产还有瓶颈吗？
生产技术应该过关了吧？
lz所属哪家公司？
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qqq111[使用道具]
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发表于 2015-7-8 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
成大的狂苗确实符合标准，这主要是因为该公司是全面引进的国外成套的毒种和灌培养技术，其灌培养阶段病毒积累非常高，残余DNA释放相对更少，这样相对减轻了纯化的压力，用现有的纯化工艺即可达到要求。这也提示我们，去除DNA应从病毒培养收获阶段想想办法，尽量减少细胞破碎，尽量增加病毒积累量。这对宿主蛋白的去除也有好处。
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uaubc[使用道具]
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发表于 2015-7-8 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能跟下游的纯化工艺有关，如果先浓缩再层析就会有问题，因为浓缩的过程中DNA会缠绕结合在病毒表面。所以如果能改工艺的话，可以将收获液澄清后直接上离子交换层析，再进行后续纯化，DNA残留应该就能达标了
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2015-7-8 18:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DNA问题还没解决吗？应该基本都能解决了吧，新版药典都出来了啊。多数是靠加酶，少部分上游培养用反应器做，效果也很好啊。控制好了，在细胞凋亡前收获，DNA会少很多。
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发表于 2015-7-8 18:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

补充一下吧，加酶处理确实是一个解决方法，但能否受到国家认可也是未知吧，关键点应该还是在上游培养，减少DNA的释放，还有战友提到了浓缩，这个确实是个问题，像成大的毒株其免疫原性比较好，根本不用做大倍数的浓缩，其下游纯化的压力就比较少，采取柱层析的方法即可。
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viviwang1987[使用道具]
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发表于 2015-7-8 18:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要么就试试CHT(羟基磷灰石)，给你找个文献参考一下。
Bioprocess (JFebruary 2010)有一篇《A Ceramin Hydroxyapatite-Based Purification Platform》可供参考，原文地址我是找不到了
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wzqzy[使用道具]
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发表于 2015-7-8 18:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在有种填料是混合机理的，也可以尝试一下，不过效果应该没加酶好。
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