细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】油红O 染色

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 21  1/3 123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】油红O 染色

鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
1

发表于 2015-7-10 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】油红O 染色


最近在做THP-1源性的巨噬细胞被刺激成泡沫细胞，想对泡沫细胞进行油红O染色，但刚做了一次，泡沫细胞里的脂质都没有染上，希望各位高手能帮个忙。我是按一篇博士论文上写的做的，他的步骤如下：
取出各组中预先放置的盖玻片，PBS液洗涤2次，给予4%多聚甲醛固定10-15分钟（这里之后要不要进行PBS 的冲洗），0.3%油红O染液染色10-15分钟（这里之后要不要进行PBS 的冲洗），再用苏木素复染3-5分钟，双蒸水冲洗后甘油明胶封片。
我基本就是按照上面的做的，但是效果很差，我自己总结的原因一个是油红O染液配的浓度太低了，因为我把 1G的油红O粉溶于100ML60%异丙醇，但是最后过滤出来的染液很少，而且还有很多的粉在瓶底，没有溶解完全的，而且我在染色之前还把染液稀释了3倍，估计这样染液浓度就更低了。
希望各位大侠高手能帮我看一下我上面的步骤有什么问题。万分感谢！
顶部
niangao1980[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107990
精华 0
积分 255
帖子 230
信誉分 100
可用分 1936
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
2

发表于 2015-7-10 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你首先要确定巨噬细胞浆中是脂质滴。个人染色体会是：形成的小脂质时好染色，小脂质滴融合成大脂质滴时脂滴易破。甲醛固定后要用PBS洗涤，但所以操作要极轻，加样不能直对玻片。油红O染色阳性不用苏木素染色也行时就别染了，过多的操作也会将油红O洗掉。
顶部
3.14[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117870
精华 0
积分 275
帖子 290
信誉分 100
可用分 2171
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
3

发表于 2015-7-10 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎么我师兄教我的要用0.2%的重铬酸钾过夜，第二天才染，不过我也才染过一次效果也不好
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
4

发表于 2015-7-10 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么我的油红O染色的片子背景有那么多的小红点，背景很不好看，大家能不能帮个忙，分析一下！
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
5

发表于 2015-7-10 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 鲇鱼少爷 于 2015-7-10 10:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

为什么我的油红O染色的片子背景有那么多的小红点，背景很不好看，大家能不能帮个忙，分析一下！

你染料是不是没有过滤啊？
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
6

发表于 2015-7-10 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我过滤过了的，配染液时过滤过，然后用之前又过滤过的
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
7

发表于 2015-7-10 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 鲇鱼少爷 于 2015-7-10 10:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我过滤过了的，配染液时过滤过，然后用之前又过滤过的

你用的是滤纸过滤的嘛
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
8

发表于 2015-7-10 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是的，我用滤纸过滤，今天下午我又做了一次染色，把配好的染液过滤了两次，但是最后染出来的片子都没有什么红色的，我自己分析的原因可能是我的染液配的时间太久了，我好像是四月份配的这个油红O 染液！最后还想问下你们染色的具体过程。万分感谢！
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
9

发表于 2015-7-10 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个是我以前拍的，背景相当的不好看，望指教！！


查看积分策略说明
附件
2015-7-10 10:53
23179948.jpg (34.47 KB)
 
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
10

发表于 2015-7-10 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是的，我用滤纸过滤，今天下午我又做了一次染色，把配好的染液过滤了两次，但是最后染出来的片子都没有什么红色的，我自己分析的原因可能是我的染液配的时间太久了，我好像是四月份配的这个油红O 染液！最后还想问下你们染色的具体过程。万分感谢！

=======================================================================

应该是的，要注意配好的油红O染液最好在2个小时内用，不能放置时间过长。
过程：你可以参考这里~cuturl('http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=33908')
顶部
 21  1/3 123››