小中大有战友PM我:
“博士您好,我今天做LAMP 的时候,反应体系中只添加内引物就能跑出梯形条带,内引物是我今天刚从原来的母液中重新稀释的.不知道这是不是说明我设计的引物有问题,跑出的是非特异性条带啊?
我的反应体系中只要内引物都加,无论外引物加一条还是两条都不加,都能跑出梯形条带,但是不加内引物,只加外引物就不能产生条带.
请博士帮我分析一下吧,谢谢了!
还有如果不是污染了,有没有可能设计的内引物就能跑出这样的梯形条带呢?很困惑,如果LAMP有非特异性扩增应该是什么样的啊? ”
我的实验结果表明,如果使用环状引物,外引物的作用就基本可被替代,尽管外引物可以加快反应速度。
“只加外引物就不能产生条带”,因为不能成环自身作为引物和模板扩增。
因此,外引物的作用相对较小。
如果是实验室污染了,只有内引物当然可以环状扩增了。我还听说过做病毒RNA的RT-LAMP,不用AMV反转录酶都扩的很好——结论只有是:扩增产物污染!