小中大不知道是没有溶解的DNA还是蛋白。我怕没有溶解,还65℃温育半小时,然后4℃放置过夜。但是第2天依然存在沉淀。我在蛋白沉淀后提上清的时候,还特别小心。
最后用分光光度计测,浓度在28ng/ul左右,OD值1.75-1.92之间。电泳跑出来也是单一的条带。
我现在就想弄清楚原因。这么低的浓度。实在担心会影响下步的PCR.
恳请大家提出宝贵的意见,不胜感激!
浓度低的原因很多,但是,上面完全可能导致DNA浓度低了,因为DNA和蛋白质,没有通过告诉涡旋振荡充分解离开,然后,离心取上清的时候,没有解离的DNA,随着蛋白质沉淀一起被沉淀丢失,就会导致DNA产量低。
你给我的信息,暂时我只能分析到这样的程度。其它分光光度计不准确,起始DNA含量是否因为血液保存反复冻融本身就低等等,都是可能。但是,目前,我只指出你最可能的原因。如果有兴趣,可以进一步沟通。
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艾德莱喜获协和医院全血DNA提取大单