小中大求助:关于荧光定量PCR的假阳性问题(探针法)
求助:关于荧光定量PCR的假阳性问题(探针法) [转自 丁香园论坛]
用荧光定量PCR检测一个基因,用的探针法。现在有两个问题:
1. 我的无模板对照总是出现曲线,在10-30循环,没有固定的位置。起初以为是污染,可更换了新的水、dNTP、探针等,基本都换了新的,还换了加样的地点,换了加样的枪,仍然出现,没有什么区别。不知道为什么?
2. 用或不用模板,总有些曲线是斜行抬高的,就是从一开始就斜着上去的。以为是探针降解,可探针也是刚买的,用TE缓冲液溶解后还是比较注意操作的。
求助各位,谢谢