小中大图中第三泳道就出现了那条很宽的带啊!
我是作PCR-RFLP,作一个基因的SNP多态性,PCR产物,我没有纯化,就直接做了酶切。(PCR产物跑琼脂糖时没有发现杂带,只是有点引物二聚体。时间跑久一点,引物二聚体也很淡,应该可以不用纯化就做RFLP吧?我要做300个左右,不纯化也可以省点事。)
PCR产物做PAGE时,只在目的位置出现条带,但一做酶切,就如上图所示了。
回amberly 战友,酶切后,如上图所示,最下面两条带,分别是139bp和120bp,相差19个bp,琼脂糖分不开啊!所以只得跑PAGE。
我以前看师兄做的时候,酶切产物作PAGE,并没出现我碰到的情况啊!
多谢PCRfan版主和amberly 战友的答复。我现在不知找哪方面的原因,为什么加了内切酶缓冲液就不行了(我分别只用内切酶缓冲液Buffer R和Buffer Tango,没加DNA,也没加内切酶,做了PAGE,结果和上图的第三孔一样。)是内切酶缓冲液里的什么成分和胶起了什么反应吗?为什么别人作可以,我做就不行?