小中大4、引物是从国外文献上拷贝下来的,国内有人在其他组织中做过MSP,引物序列和国外文献一样。引物是由上海生工合成的,溶解是用的TE缓冲液,然后分装,放在-20度保存。
5、查找原因时,我将第一步dna提取得到的dna溶液,每个样本取了6微升,用0.8%凝胶电泳跑电泳,结果maker条带依然很好,找了个老师看了一下,他说其他区域什么也没有。(是不是dna就没有提取出来?)
6、整个实验过程没有严格消毒。
于是这周我开始从DNA提取步骤开始查找原因,在第一步DNA抽提过程中,我发觉放入蛋白酶K后56度水浴三小时后,液体还是有絮状浑浊,似乎消化的很慢,后来第二次实验我加入了说明书上所写的两倍多的蛋白酶K的量,56度水浴过夜,第二天还是有一些絮状混浊,当然比第一次少一点,我就没管它,继续进行下面离心柱抽提dna,然后我把这两次提取的DNA,直接用0.8%的凝胶电泳跑电泳,紫外光下观察发现样品1出现的是从注入孔开始一长溜暗条带,而不是在某一位置有一个亮条带,样品2出现的是从注入孔开始一窄的纵向亮条带。我找了一个老师看,她说出现样品1的图可能因为dna的量太少,而且都是碎裂的DNA,各个长度的都有,出现样品2的图可能是注入样品时点状注入没有铺开,而且她说这样的DNA,如果勉强进行下面的甲基化修饰和PCR,很难出结果。
我想请教一下为什么抽提出这样的DNA,是不是石蜡标本的dna不好提取?还是本身就已经降解很多?还能进行下面的甲基化修饰和甲基化PCR吗?