小中大楼上两位战友真是太好了，看了zhujing129战友的帖子很受益：）最近自己也提了近20管血，有点心得也有点疑问呵呵。
1、看到很多帖子都是将外周血先离心后去血浆，再进行稀释加FICOLL等操作。我也试过，觉得除了省了点FICOLL但具体效果说不清。不知道大家是多少转几分钟离心的，这样离心后是不是会影响稀释血的比重从而影响PBMC的提取？另外我发现无论是否先去过血浆，加FICOLL离心后最上面那层血浆层（含血小板和破裂细胞）几乎一样多，不是应该少吗？
2、心得：加完FICOLL和稀释血尽快离心。说明书上一再说明加稀释血入FICOLL时不能破坏界面，发现由于存在密度差，一般都不会破坏，但如果等会再离心，上面的血就会渗下去，看见一个个小血珠，这时候再离心一般FICOLL层会很红，提的PBMC也很红。
3、个人觉得FICOLL恢复室温再用不是很关键，甚至在温度低的时候好像更容易分层。。。
4、离心分四层后不要立即将离心管从离心机取出，静置3-5min可能收到的PBMC更多点。
5、吸PBMC层是不要吸完上层再吸，不容易观察。
6、提出后离心总是混点红色，这到底是RBC还是PLT？不知道有什么办法去掉？？？还有我是用来提RNA的关系大吗？（理论上应该没多大关系。。。）
7、不知道大家全血提RNA一般用多少血，我用3-5ml，总是提的蛮少的。。。
希望有一路的战友讨论讨论，实验的道路总是艰险，呵呵：）
