液相色谱

我一直认为凝胶过滤层析（GFC），尺寸排阻层析（SEC），凝胶渗透层析（GPC）都是一回事，它们都是常用的液相色谱（LC）方法。但是为什么我们用的WATERS公司的Breeze软件将GPC和LC两个范畴分开讨论？

有没有老师能告诉我它们的区别啊？

还是我的理解有问题呢？

尺寸排阻层析（SEC）即空间排阴色谱法是根据被分离组分分子的线团尺寸而进行分离，其固定相是多孔性凝胶，帮此法称为凝胶色谱法。该色谱法按流动相的不同分为两类：以有机溶剂为流动相者称为凝胶渗透层析（GPC），以水溶液为流动相者称为凝胶过滤层析（GFC）。凝胶色谱法的分离机制只取决于凝胶的孔径大小与被分离组分线团尺寸之间的关系，与流动相的性质无关。

就是说GPC是其中一个分支吗？

没说到点子上啊。关键是：GPC/SEC/GFC一般都是用外标曲线法，而LC则需要通过保留时间来判断样品峰是什么物质，当然需要在一定的色谱条件下，所以更多地使用内标法，因此，通常GPC与LC的软件计算方法不同，无法用同一个软件来做。而这也跟GPC/SEC与LC的分离原理不同有关系。LC上，样品与色谱柱固定相填料有吸附-解吸附的过程，而GPC/SEC则没有（也不能有）这一过程，完全靠尺寸排阻分离。GPC/SEC/GFC只是仪器硬件构成上与LC很相似，一般来说更简单些，而从分离过程的原理来说，与LC完全不同。现在还有更新的、更复杂的分析仪器方法了，既使用外标法测分子量、尺寸，又需要使用内标法通过保留时间来确定化学性质。例如：聚合物共混物的分析就是应用实例。

GPC/SEC/GFC一般都是用外标曲线法，不也需要标准物质比对吗？实质有什么不同，我认为你说的也不是很合理。

当然需要标准物质了啊，但是GPC/SEC/GFC和HPLC的标定还是不同的：HPLC是通过标定来确定在某一个保留时间处所出的峰是什么物质，通俗说是什么东西、是哪种物质；而GPC/SEC则不同，标样标定的是分子量、准确说是流体力学体积的大小，与具体是何种物质无关。我觉得你还是没有完全理解这两种方法，呵呵，估计你没有真正做过GPC/SEC，否则你就会理解了。HPLC用标样定性，是确定其化学性质；而GPC/SEC用标样定性，是确定其分子量、体积等物理化学性质，这一性质是数字的、连续的，因此才需要用外标曲线法，将样品峰与这一曲线结合，即可得到峰值分子量。而且，往往是标样与样品并不是同一种化学物质，此时得到的分子量就叫做相对分子量了。在高分子物理教材中才会比较详细地介绍GPC/SEC的知识和相关技术，而在仪器分析教材中对GPC/SEC的介绍就相对简单些了，也是因为在高分子专业中会较多用到GPC/SEC。其实，这部分内容在色谱的基础知识中是有描述的，仪器分析教材中都可以找到。