小中大PCR电泳结果初步定量分析
PCR电泳结果初步定量分析
前几天一直想找一个好的pcr条带定量分析软件，但是结果不是不好用就是软件分析的结果感觉差别大，其中试过bandscan5，但是出来的结果不是很好。
于是想到了ipp，ipp可以定量分析组化的照片，而且结果比较可靠，但是pcr的电泳图片是黑白的，如果用ipp分析，结果是与实际相反的，条带亮的数值小，而条带暗的数值大，（因为它是分析的目标区域的吸光度值，当然条带暗吸光度值就会大，这些数值本身是正确的）。但我想得到这样一个结果：电泳条带亮的得出的数值大，条带暗的得出的数值小，如果用常规的ipp分析，结果只能是适得其反。本人通过几天摸索，联合应用photoshop和ipp初步得出的一个期待的结果，分享给大家。
步骤：
1.选择要处理的电泳照片。
2.在photoshop里打开，然后在图像里选择反相，将照片的黑白反过来并保存。
3.在ipp里打开反相后的照片，选择IOD为分析手段分析各条带累计光密度值：这是由于背景是白条带是黑，得出的数值就会是条带“亮”数值大，条带“暗”数值小。
如果想分析目标分子处理前后表达的变化，就可以连同内参的条带一起分析，得出数据后送入excel,用相应的条带除以各自对应的内参数值，最后比较两个比值就可以知道表达是增高还是降低。
以上是本人初步摸索的，仅供各位参考，也希望大伙提供更好的建议和方法。
谢谢！
[ 本帖最后由 miracle 于 2011-9-5 15:14 编辑 ]
