小中大从用PRIMER设计引物到查看您所设计的引物会不会有目的产物
从用PRIMER premier设计引物到查看您所设计的引物会不会有目的产物，以人的APP基因为例 [转自 丁香园论坛]
从用PRIMER premier设计引物到查看您所设计的引物会不会有目的产物，以人的APP基因为例
1、 打开pubmed cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/') ，在search的下拉菜单中选择 Gene或者直接打开这个链接cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene')
2、 输入 APP （或者其他的 待测基因名称或者缩写均可，以下均以APP为例）；点GO，出来的结果是各个物种的APP基因，人的排在第一个（一般人[Homo sapiens]，大鼠[Rattus norvegicus]，小鼠[Mus musculus]，都排在前几个。），现在设计人的APP普通或者定量PCR引物，所以选择Homo sapiens，截图如下：这些摘要信息会显示该基因所在染色体具体位置，别名，基因编号等。
3、 点击蓝色的APP字母进入查看具体信息（包括DNA序列和RNA序列等），要人的就点人的：如下图
4、 点击后进入网页，如cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/351?ordinalpos=1&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Gene.Gene_ResultsPanel.Gene_RVDocSum') ， 设计RNA引物可以跳过第5步（DNA序列查看和引物设计）直接看第6步即可。
5、 进入之后往下拖网页，可以看到一个NC-000021.8的黑体字， 左键单击它可以看到第二行是Genbank（会出现三行，第一行是FASTA,中间一行是Genbank,第三行是Graphics，这三种都是核酸序列显示格式而已，通常选择Genbank查看基因组序列，）再左键单击Genbank，即进入到该基因的DNA序列查看网页。（这里显示了该基因DNA长度多少，从多少碱基到多少碱基等信息。）拖到此网页的最下面就可以看到完整的DNA序列。
6、 设计RNA引物，进入之后往下拖网页，可以看到一个NC-000021.8的黑体字，这里显示的是DNA信息，继续往下拖网页，可以看到黑体字 mRNA and Protein 下面列的就是RNA和蛋白信息的链接 如
NM_000484.3 → NP_000475.1 amyloid beta A4 protein isoform a precursor
NM就表示mRNA，NP表示蛋白（Protein），（APP比较特殊，有7份mRNA，大多数基因只有一个mRNA，可能跟它被研究的比较多有关系），这么多也不能一一设计引物了，所以就以第一个mRNA为例，点击（左键单击）NM_000484.3进入它链接的网页，即cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_000484.3') ，此时可以看到此条APP的mRNA相关的信息
NCBI Reference Sequence: NM_000484.3
Homo sapiens amyloid beta (A4) precursor protein (APP), transcript variant 1, mRNA
LOCUS NM_000484 3648 bp mRNA linear PRI 13-DEC-2009
DEFINITION Homo sapiens amyloid beta (A4) precursor protein (APP), transcript
variant 1, mRNA.
ACCESSION NM_000484
VERSION NM_000484.3 GI:228008403
KEYWORDS .
SOURCE Homo sapiens (human)
一直往下拖，到最后可以看到mRNA的序列（途中可以看到gene，exon【外显子，即转录成mRNA的区域】，CDS【编码蛋白的区域】，这些都不用管，可以了解下）拖到最后看到了mRNA的序列，ctrl+C复制此序列，以备放入Primer premier
