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标题:求助：Taqman 探针 PCR 扩增曲线

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发表于 2011-8-23 12:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

求助：Taqman 探针 PCR 扩增曲线

求助：Taqman 探针 PCR 扩增曲线 [转自 丁香园论坛 ]


大家好，我是用taqman real-time PCR方法研究SNP与疾病的相关性。
有个疑问，为什么我的ROX曲线是漂在最上面的？？？？？？？？96孔全都是这样的，每板都是这样。。。真懊恼。实在找不出原因？然而，别人帮我做的同一个位点，ROX曲线就不是漂在最上面。请大侠们，帮我分析一下，是哪个环节出了问题？？？不甚感激！


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发表于 2011-8-23 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再如下图：


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发表于 2011-8-23 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个图谱到没有注意过，重要的是你的扩增曲线怎么样？如果扩增曲线正常可以不必考虑。
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发表于 2011-8-23 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 阿拉蕾 于 2011-8-23 12:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这个图谱到没有注意过，重要的是你的扩增曲线怎么样？如果扩增曲线正常可以不必考虑。

您好，感谢你的回复。从我传的两个图，可以看出来，ROX曲线漂在最上面的，扩增曲线并不好。。。没有下面那个图扩增的好~~~~~能帮忙分析一下原因吗？  
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发表于 2011-8-23 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
ROX是一个参比荧光，主要用来消除管间差异。一般是参入mix中。我不知道你rox是如何添加的。上面的图rox特别高，就会造成你的扩增曲线的deltRn很低，看似没有扩增一样。我觉得注意加样方式或许能改变。
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发表于 2011-8-23 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思，没能帮助你！我也准备用这种方法检测SNP分型呢，请问你的引物和探针是在哪家公司合成的啊？
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发表于 2011-8-23 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是5ul的反应体系。加样顺序为 H2O 1.275ul，MIX 2.5ul，ROX 0.1ul，taqman 0.125ul，*100份，混匀后，分装到96孔板里，最后加DNA。您看，有什么问题吗？或者有什么需要特别注意的？
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发表于 2011-8-23 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
ABI公司
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发表于 2011-8-23 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
ABI的是不是很贵？我找国内的公司合了两条，5000块，效果还可以。
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阿拉蕾[使用道具]
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发表于 2011-8-23 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
5ul的体系是不是太小了？我想至少做到20ul吧。我用的ABI7500。
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