PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 求助：用Taqman探针测人类基因拷贝数的问题~~~

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 13  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:求助：用Taqman探针测人类基因拷贝数的问题~~~

米米[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70422
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
1

发表于 2011-8-23 12:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

求助：用Taqman探针测人类基因拷贝数的问题~~~

求助：用Taqman探针测人类基因拷贝数的问题~~~ [转自 丁香园论坛]


现在测人类Y染色体上一个基因的拷贝数，用的AB公司的Copy Number Assay 试剂盒，AB技术告诉我可以不用做标准曲线，可是我看到的文章都做了标准曲线，感觉技术在忽悠人呢……

想问问广大战友们测拷贝数的时候都做了标准曲线了么？

制作标准曲线时用的质粒还是全基因组DNA样本来稀释的呢？

谢谢赐教啊~~~~
顶部
嘉年华[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70441
精华 0
积分 222
帖子 184
信誉分 100
可用分 1651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
2

发表于 2011-8-23 12:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
AB的方法有自己的内参照基因，类似相对定量，配合AB的软件，可得出与参照基因的倍数关系，不是用标准曲线方法，所以不用做标准曲线。
顶部
嘉年华[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70441
精华 0
积分 222
帖子 184
信誉分 100
可用分 1651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
3

发表于 2011-8-23 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用AB的产品可以咨询AB的技术支持，也可以跟帖大家讨论哦，供站友参考。
顶部
米米[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70422
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
4

发表于 2011-8-23 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢前辈~~!

安心一点了，您是不是做过啊，有些细节问题想请教一下~~
顶部
米米[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70422
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
5

发表于 2011-8-23 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
想问问大家做实验过程中遇到Copy caller软件结果显示 undetermined 时都是怎么处理的啊？（样本有扩增曲线，但是34循环才开始扩增）

AB的技术告诉我这种情况是软件分析能力有限，不知道各位战友都是怎么处理这种结果的啊？
顶部
嘉年华[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70441
精华 0
积分 222
帖子 184
信誉分 100
可用分 1651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
6

发表于 2011-8-23 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在ABI7500的仪器上，34循环才开始扩增，我一般认为是阴性结果，这么晚起峰，复孔也十有***不会重复很好，还是想法提高模板量，或扩增效率。
顶部
嘉年华[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70441
精华 0
积分 222
帖子 184
信誉分 100
可用分 1651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
7

发表于 2011-8-23 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Copy Caller软件大约6、7倍之内的拷贝数还算可以，再高的话也不是太准确了。
顶部
米米[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70422
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
8

发表于 2011-8-23 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是Step one plus 跑的，刚开始做，很多都还在摸索当中啊~~~

请问前辈：Copy Caller软件结果分析时，加确定拷贝数的样本做参照了么？
顶部
嘉年华[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70441
精华 0
积分 222
帖子 184
信誉分 100
可用分 1651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
9

发表于 2011-8-23 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不一定用 “确定拷贝数的样本做参照”，但一定要用在二倍体生物中已经明确为两拷贝的基因为内参照基因。
顶部
米米[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70422
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
10

发表于 2011-8-23 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩，试剂盒里的内参就是确定两个拷贝的。
前辈，如果待测的基因拷贝数可能比较大的话，比如20—30，还可以用实时荧光定量的方法检测么？技术也说Copy Caller检测10以内的比较好。  
顶部
 13  1/2 12››