PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » RT—PCR 杂带、拖尾问题解决方法

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 14  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:RT—PCR 杂带、拖尾问题解决方法

爱哭鬼[使用道具]
二级
Rank: 2


UID 70448
精华 0
积分 148
帖子 76
信誉分 100
可用分 1081
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
1

发表于 2011-8-23 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

RT—PCR 杂带、拖尾问题解决方法

RT—PCR 杂带、拖尾问题解决方法 [转自 丁香园论坛]


各位做过RT—PCR的战友们，我刚开始做实验，电泳跑出来的杂带特别多，请问有什么解决方法？多谢指导！！
以下是我的电泳结果，请各位高手帮忙分析分析。谢谢！！


查看积分策略说明
附件
2011-8-23 12:37
97245898.jpg (11.31 KB)
 
顶部
阿拉蕾[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 69963
精华 0
积分 511
帖子 701
信誉分 100
可用分 4251
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-3
状态 离线
2

发表于 2011-8-23 12:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
据我个人经验：
1、适当减少胶中EB含量；
2、适当增加电泳电压及电泳时间。
顶部
爱哭鬼[使用道具]
二级
Rank: 2


UID 70448
精华 0
积分 148
帖子 76
信誉分 100
可用分 1081
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
3

发表于 2011-8-23 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢指点，我试试吧！  
顶部
嗡嗡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70430
精华 0
积分 168
帖子 75
信誉分 100
可用分 1106
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
4

发表于 2011-8-23 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的意见是重新设计pcr引物
顶部
椰子叶子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70440
精华 0
积分 270
帖子 300
信誉分 100
可用分 2226
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
5

发表于 2011-8-23 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问题是在这些带中有没有你的目的条带啊？如果没有，建议你提高退火温度，如果提高到68度还没有，换引物。
顶部
爱哭鬼[使用道具]
二级
Rank: 2


UID 70448
精华 0
积分 148
帖子 76
信誉分 100
可用分 1081
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
6

发表于 2011-8-23 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我有重新调整了反应体系以及退货温度，现在结果还是算满意，就是marker的条带老是跑不好，不知是什么原因？还有就是重复实验结果有时候有偏差。以下是我最近的结果：
顶部
爱哭鬼[使用道具]
二级
Rank: 2


UID 70448
精华 0
积分 148
帖子 76
信誉分 100
可用分 1081
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
7

发表于 2011-8-23 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我有重新调整了反应体系以及退货温度，现在结果还是算满意，就是marker的条带老是跑不好，不知是什么原因？还有就是重复实验结果有时候有偏差。以下是我最近的结果：


查看积分策略说明
附件
2011-8-23 12:39
86729329.jpg (10.45 KB)
 
顶部
嗡嗡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70430
精华 0
积分 168
帖子 75
信誉分 100
可用分 1106
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
8

发表于 2011-8-23 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胶配的不好，是不是没等凝好就拔梳子了？
顶部
阿拉蕾[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 69963
精华 0
积分 511
帖子 701
信誉分 100
可用分 4251
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-3
状态 离线
9

发表于 2011-8-23 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、或许你配制的胶有问题
2、或许你点marker的时候，戳破胶孔了；或者不应该点在最边上
3、适当的降低电压，延长电泳时间，增加胶的浓度
顶部
跳跳糖[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70449
精华 0
积分 157
帖子 73
信誉分 100
可用分 1066
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
10

发表于 2011-8-23 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用的是进口的MARKER ，条带太多，要跑的时间很久才能分开！

请关注bioteke 生物
顶部
 14  1/2 12››