PCR仪

你好，我也正打算做LAMP，不知道你的引物设计出来了吗 ？
是用什么软件啊？你要检测的是什么啊？

您好，我想问一下您们设计引物的时候是不是就是用官方网站上专门设计LAMP引物的软件来设计的啊？我看网站上说那个软件对计算机的要求很高是这样的吗？
还有我想问一下扩增产物怎么测序才能知道所扩增出的序列是不是目的序列啊？如何判断是否有非特异性扩增啊？
望指教，谢谢！

官方网站上专门设计LAMP引物的软件是可以用的，不过它设计出来的太多，你要自己选择一个。

LAMP的扩增产物是片段长度不等的混合物，没有办法测序的。要判断所扩增出的序列是不是目的序列，有以下方法：

1. 电泳。LAMP有自己特征的电泳谱带，最小的条带是你扩增片段的大小；
2. 酶切。在你扩增片段内选择一个酶切位点，因为LAMP的扩增产物是一些重复序列，所以酶切后条带就很单一了。
3. Southern杂交。这个当然说明问题了。

LAMP非特异性扩增的机会很小，你想啊，四对引物，针对靶基因的6个区域，比PCR特异多了。

1. LAMP引物不一定要是HPLC级别的，我用的与普通PCR引物一样的PEAG纯化；引物浓度F3/B3 0.2uM，FIP/BIP 0.8uM；
2. 我就用普通PCR的MgCL2溶液，终浓度4mM，更少好像不行；
3. 这个是LAMP方法的大问题，因为太灵敏了。只换灭菌水好像不能解决问题的。严格分区。我准备加UNG了。