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标题:RNA,CDNA,DNA的保存方式和时间？？

幸福无罪[使用道具]
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发表于 2011-8-23 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

RNA,CDNA,DNA的保存方式和时间？？

RNA,CDNA,DNA的保存方式和时间？？ [转自 丁香园论坛]



关于RNA,CDNA,DNA的保存方法和时间的帖子为数不少，但好像有的不太一样，，我想问问有过丰富经验的园友，具体的关于提取出的RNA，逆转录的CDNA，还有已经PCR后的DNA的具体的保存方法（如：溶剂，温度等）和保存时间，谢谢!!
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发表于 2011-8-23 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
RNA： 可以放在1.5的eppendorf管中加1ml75%乙醇，-80度保存。大约可保存一年。

CDNA,DNA：这俩者的保存方法一样，逆转录出来的cDNA可以直接放在4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。DNA应该溶于TE中，4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。

PCR产物的保存：可以直接放在4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。

不知道有没有说清楚。
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发表于 2011-8-23 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！
我也正好有这样的问题．
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发表于 2011-8-23 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问一下：ＲＮＡ在－２０度下能保存多久？
我们没有－８０度冰箱啦．
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发表于 2011-8-23 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有在-20保存过，不知道你提取的RNA是做什么样的实验，如果接下来的步骤是逆转录成cDNA，然后再进一步实验，那你不妨辛苦一下，提出RNA并检样后做逆转录，变成cDNA后就容易保存了。
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 小中大
ＲＮＡ在－２０度下能保存多久？

我试过在－２０度放了一星期，还能跑出3条带的。具体有多久，不是太清楚了。
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发表于 2011-8-23 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
DNA的保存是要看浓度的，例如把ＤＮＡ稀释为２５ng/ul，-８0保存了半年普通ＰＣＲ就重复不出原来的结果了（只有smear）,所以还是要当心
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发表于 2011-8-23 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问用组织做RT-PCR时，为什么要先提取RNA再超低温保存？能不能先低温冷冻组织再室温解冻后做RT-PCR，对反应结果有何影响？请各位大虾多多指教！
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发表于 2011-8-23 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以在低温下保存,但是必须是取出后迅速用液氮速冻,而后置于-80冻存,如果需要提RNA时,将组织取出,但必须在冰浴情况下剪切匀浆,这样不至于RNA降解.反复冻溶不好,最好是取出组织后尽快做.这是我的一点体会.
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发表于 2011-8-23 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充
RNA： 可以放在1.5的eppendorf管中加1ml75%乙醇，-80度保存。大约可保存一年。
　　一般未纯化的RNA直接在－80度放置二周会有明显的降解

CDNA,DNA：这俩者的保存方法一样，逆转录出来的cDNA可以直接放在4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。DNA应该溶于TE中，4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。
　　cDNA,DNA均不宜放置4度，cDNA大概两天PCR效果会有明显降低，毕竟cDNA要先取材料－－提RNA－－反转录，谁也不希望自己辛苦得到的cDNA一周后基本不能用了吧。两者均应用TE稀释后－20度保存。

PCR产物的保存：可以直接放在4度保存，若长期不用，可分装，然后-20度保存。
同样就用TE稀释后－20度保存。
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