小中大PCR测序有杂带,模板不纯怎么办?
PCR测序有杂带,模板不纯怎么办? [转自 丁香园论坛]
最近用以下引物PCR,测序时公司反馈模板不纯,有杂带,请问园中高手怎么改进?非常感谢!
基因A
F 5’ –GTG CTG CAG GTG TAA ACT TGT ACC AG-3’
R 5’ –CAC GGA TCC GGT AGC AGC GGT AGA GTT G-3’
基因B:
F 5’ –AGG ATC CCC GCA GAG GAT TTC GTG TAC CAG-3’
R 5’ –TCC TGC AGG ACG CTC ACC TCT CCG CTG CA-3’
反应体系(试剂采用的是Tiangen公司的Master Mix ),PCR循环条件:
94℃预变性3min,进行如下循环:94°变性30S
55°退火30S 72°延伸30-40s, 30个循环, 最后72°延伸5min
望各位高手指导啊,谢谢